做wb实验每次只加一种一抗，可以同时加两种或者多种一抗的吗？

最好不要，根据抗体而定，只是基础成分一般都是TBST或PBST。抗体说明书会写到底加BSA还是NF-MILK。有钱还可以买专用稀释液，特异性进一步降低，成分可能包括人工合成的肽、明胶、酪蛋白、多糖类等。

最好还是不要同时加两种及两种以上一抗。因为如果结果里面有非特异信号的话，就说不清楚了。做免疫印迹实验中在同一张膜上检测目的蛋白和内对照，也是先上目的蛋白的一抗、二抗，ECL发光检测、压片、洗片；漂洗以后，再上内对照的一抗、二抗，ECL发光检测、压片、洗片。

理论上来说是可以的，但是不同种一抗是否兼容不相互影响，各自应该加多少量这些条件都需要特别摸索优化。优化过程本身，包括了分别单独做每个一抗，确认在不受干扰条件下该抗体在特定样本中得到的条带究竟在什么位置，有哪些背景。