请问明明BCA定量完了，为什么每次跑出来的GAPDH都不齐呢？还有其他蛋白归一化的方法吗？

可能因为BCA测定的是组织内总蛋白的量，组织内细胞类型较多的话，测定的某一特定蛋白的浓度会不准确，可以根据各条带的灰度调整下上样量，即调下内参试试。蛋白浓度测定除了BCA法外还有紫外吸收法，双缩脲法，考马斯亮蓝法等等。

如果内参没有选择错误，而只是内参不齐的话，那说明你的蛋白定量有问题，只需要根据内参的IOD做一下上样量的调整就可以了。

GAPDH不齐会不会是loading的体积没有加上或蛋白降解也有可能的，最好免疫印迹前定量，转膜或显影不齐后有没有适当自己调整上样量，有时我定量后也不太齐就自己调整下体积。