非特异性免疫荧光染色

可以适当延长封闭时间或者提高封闭液的血清浓度

如果已经清除了固定液残留物，那么可以考虑增加吐温洗涤步骤来减少非特异性染色的发生。

吐温是一种表面活性剂，可以增加染色过程中试剂与样品的接触面积，有利于去除非特异性结合物质和离子。一般情况下，吐温的浓度为0.1%左右，可以在洗涤缓冲液中加入。

增加吐温洗涤步骤的具体方法可能因不同染色实验而异，一般需要进行优化。可以考虑增加洗涤步骤的次数或时间，并在每个洗涤步骤中加入吐温。此外，可以尝试调整洗涤缓冲液的pH值或离子浓度，以优化吐温的效果。

需要注意的是，过多的吐温可能会影响染色效果或造成样品损伤，因此需要谨慎使用。在进行实验前，建议先进行一些小规模的试验来确定最佳的吐温浓度和洗涤步骤，以获得最佳的结果。

消除非特异性染色的方法

消除荧光抗体非特异性染色的方法应根据产生的原因采取适当的方法。Casella GT（2004）报道的在石蜡切片降低与醛固定有关的自发荧光方法是，抗原修复后组织立即浸入0.1%硼氢化钠（PBS配）室温30分钟，然后水漂洗5分钟。为了降低色素如血红蛋白、脂褐质的自发荧光，切片浸入过滤后的0.5%苏丹黑（Sudan black，70%乙醇配制）室温5分钟然后自来水流水冲洗3分钟。这种方法比较简便、实用。其他可以考虑的方法有以下几种：

1．动物脏器粉末吸收法

2．荧光抗体稀释法

3．伊文氏蓝（Evans blue）衬染法