天一湖医者
一般用 0.1%皂角苷戒 0.02%的Triton X-100 进行通透。
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免疫染色通透液(Triton X-100) (Immunostaining Permeabilization Buffer with Triton X-100, 也称Immunostaining
Permeabilization Solution with Triton X-100),可以用于免疫染色等多种原位检测时细胞样品、冰冻或石蜡切片的通透处理,有助于暴露抗原、核酸等作用靶点,使抗体、探针或标记物等更容易进入细胞内,从而确保染色等的检测效果。
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对于通透效果要求不高的情况,可以使用免疫染色洗涤液(P0106, P0106C, P0106L),对于需要检测细胞膜蛋白的情况推荐使用免疫染色通透液(Saponin) (P0095)。对于通透要求比较高的情况,可以使用免疫染色强力通透液(P0097)。对于凝集素(lectin)的检测推荐使用免疫染色强力通透液(P0097)。
通透液通常可以通过使用有机溶剂例如甲醇、丙酮等,或者使用去垢剂例如Triton X-100、Saponin等来实现对于细胞膜的通透。
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细胞免疫荧光和组织免疫荧光实验中,通透剂的主要作用是增强抗体与靶分子之间的结合,从而提高免疫染色的灵敏度和特异性。常用的通透剂包括Tween-20、Triton X-100和NP-40等。
这些通透剂作为表面活性剂,能够破坏细胞膜或组织中的脂质双层,使抗体更容易与细胞内或组织内的抗原结合。具体原理如下:
Tween-20:是一种非离子表面活性剂,可破坏细胞膜的脂质双层结构,使抗体更容易穿过细胞膜与细胞内抗原结合。
Triton X-100:是一种非离子表面活性剂,它能够破坏细胞膜和核膜的脂质双层结构,使抗体能够更容易地穿过细胞膜或核膜,与细胞内或核内的抗原结合。
NP-40:是一种非离子表面活性剂,也可以破坏细胞膜和核膜的脂质双层结构,增强抗体与细胞内或组织内抗原的结合。
需要注意的是,通透剂的浓度应该适当,过高的浓度可能会导致细胞或组织的结构被破坏,从而影响染色结果的准确性。通常使用的浓度范围为0.1%-1%。
此外,在使用通透剂的过程中,也需要注意控制实验条件,比如温度、时间和pH等,以确保实验结果的可靠性。
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一般常用Trion-x100。