细胞转染了带FLAG的质粒为什么看不到荧光？

和你表达的蛋白有关系.如果转染后24h没有达到蛋白表达的峰值,或者呈比较低的表达量的话,做IF时可能会信号很低,有的甚至可能观察不到信号.

可能是质粒没有成功转进去，或者是荧光没有结合上

Flag只是普通的标签蛋白，并非荧光标签蛋白，使用flag所要看到荧光需使用flag特异性抗体和对应的荧光二抗

在细胞转染了带FLAG标签的质粒后，出现荧光弱或不明显的原因可能是多方面的。

一种可能性是，质粒转染后FLAG标签的表达量较低，不足以产生明显的荧光信号。这可能与质粒的转染效率、细胞类型、细胞状态等因素有关。

另一种可能性是，荧光显微镜观察的条件未能充分激发和检测荧光信号。例如，可能需要使用更加敏感的荧光显微镜或增加荧光素的浓度，或者更改观察细胞的条件（如细胞的密度、生长状态等）等。

尽管荧光信号较弱或不明显，但是转染后目的蛋白的变化被WB验证了，这表明FLAG标签的蛋白确实被成功表达了，虽然可能表达量较低。此外，需要注意的是，荧光信号和WB检测是两种不同的检测方法，其敏感性和特异性也不同，所以对于同一个样本，荧光信号和WB结果不一定完全一致。