毛利小五郎的徒弟
做 Brdu 标记神经干细胞免疫荧光,二抗为 FITC 标记,想知道免疫酶染色中的 3% 过氧化氢及 2N 盐酸是否还需要用?
loveliufudan
在免疫荧光实验中,过氧化氢和盐酸通常用于免疫酶染色的显色步骤。过氧化氢用于去除样本中的内源性过氧化氢,以避免假阳性结果。2N 盐酸则用于裂解细胞膜和细胞核,以释放酶底物和染色质,并使细胞内的目标抗原易于识别。
但是,在进行免疫荧光实验时,由于您使用的是二抗 FITC 标记,而不是酶标记,因此不需要使用过氧化氢和盐酸进行显色步骤。因此,您可以不使用 3% 过氧化氢和 2N 盐酸。
需要注意的是,即使您不进行显色步骤,仍然需要进行适当的细胞前处理和荧光染色步骤,以确保准确的结果。
sswei
如是用过氧化物酶做标记,就必须用 3% H2O2 以去除内源性过氧化物酶;2N 盐酸需要使用,目的是使 DNA 变性,让 Brdu 抗体能够充分地与已经掺入的 Brdu 结合。
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