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肾癌组织切片的免疫组化
小小小小小芳
采集标本后立即离心取上清液用冰袋泡沫盒(需6小时到实验室)带回来的效果好些
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问
采用q-PCR法检测端粒长度,引物选取的是多篇文献及专利中的常用引物,为什么在对照水中会存在扩增曲线
小小小小小芳
最大的可能还是你的引物污染,或者本身引物就不是很好。
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问
奶中乳酸数应该大于1×106CFU/g(mL)还是等于1×106CFU/g(mL) 2022-11-
小小小小小芳
奶中活菌的含量应达到1×106cfu/g(或cfu/ml)以上,欧美及日本等国则规定应达到1×107cfu/g以上。
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问
中性粒细胞贴壁和培养时间的问题
哼宝Henry
中性粒细胞不是贴壁细胞啊?怎么会贴壁??而且中性粒细胞是不增殖不分化的,半衰期只有36h左右
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问
小鼠股骨切片方向选择
小李子KVH3
冠状面,不仅可以标准化,还可以解决高龄小鼠长骨中松质骨骨量有限的问题,被广泛采用
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问
求助人Th17细胞的诱导
毛利小五郎的徒弟
给予CD3及CD28抗体刺激后在培养体系中加入白细胞介素6及转化生长因子β,试一下。
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问
LPS刺激THP-1,炎症模型一直建不起来,求助🆘
huarenqiang5
个人感觉THP-1细胞比较敏感,容易受到外界的刺激,即使是更换血清和1640培养基的品牌也需要一周左右时间适应,有时可能会出现自动贴壁的情况。推荐使用进口血清和进口1640,且细胞适应后不要随意更换。
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问
免疫组化400倍显微镜下怎么计算细胞数?
汤姆卜丽波
因为你一般都要先从小到大,如果50倍看到的视野有8个细胞,那么400倍就是一个细胞,逆推就可以知道当前视野有多少细胞
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问
PEI转染试剂有沉淀了还能用吗?
秋秋欣欣
融化了之后吹打一下沉淀会溶解吗,如果还是不行的话建议还是不要继续使用了
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问
荧光共振能量转移实验(FRET)
毛利小五郎的徒弟
荧光共振能量转移技术实验图如下
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问
救助!多糖提取的问题
大草原的小灰驴
加热的温度和时间问题吧,尤其是周围温度过高使LPS析出并且凝固。
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问
肿瘤病理免疫组化有统一标准吗?
drhyg2005
有些指南要求病理报告单的内容和规范。
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问
PSD95半定量,计算其平均灰度值时,为什么不直接在原始图中,而是在merge切割通道后选green通道进行计算?
汤姆卜丽波
类似于初始半定量可能会有一些地方是非特异性的,merge之后就会把这些非特异性的去除掉
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问
怎样才能把胶跑的非常漂亮,泳道都能很直,上样的量和灌胶是否很重要,电压有什么要求?
毛利小五郎的徒弟
首先就是制胶的过程,选择浓度合适的分离胶,然后制胶过程要规范,轻柔,避免气泡和不均匀,一块好胶是跑胶的前提。其次调整好ph,电离度,和电压。一般来说上样量宁大勿小,电压需要根据你蛋白的分子量进行调整。
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问
做Western Blot时,同样的抗体免疫组化能做出,而Western Blot却不能?
balalaLy
要看这个抗体能不能做wb,就算能做,如果表达量很低也是比较难做出来。其次是你这个蛋白如果是核表达的话可能会因为裂解不充分导致蛋白提取失败或者提取量低。
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问
想问一下细胞裂解液选择蛋白酶抑制剂时有什么原则吗?受不受组织来源的影响?胞膜和胞浆有区别吗?
毛利小五郎的徒弟
如果你知道具体的蛋白,比如胰蛋白可以选择胰蛋白裂解剂。如果不知道具体蛋白可以选择广谱的抑制剂
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问
免疫组化和WB可以用同一种抗体吗?
申东熙老伯
可以的,买抗体的时候主要买能做这两种实验的抗体,一般都会标注清楚。
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问
要做磷酸化某因子WB,其二抗有何要求?
balalaLy
二抗没有特殊,关键是一抗要选择对,得能识别磷酸化的
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问
大分子量蛋白200KD或以上,在做WB要注意什么呢?
c_Yeats
1.试试4-20%的梯度胶电泳2.电转过程优化方案,湿转恒流200mA 2.5H,0.45um PVDF膜,一定要多加冰袋制冷。3.可以在转膜液加0.1% SDS
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问
做组织样品的WB的时候,怎样处理样品?
balalaLy
确保组织取下来后尽快处理,或者液氮冻存。含血液多的组织还得用生理盐水冲洗一下。将组织块剪碎,然后超声裂解或者液氮研磨。
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