瞭望塔
求助 用0.
9mol/l的氯化钠盐析,4℃过夜,第二天可以看到大量胶状沉淀,离心后,但
用0.5mol/l的乙酸复溶,再次0.9mol/l盐析,开始没有沉淀析出,后续两三小时后有沉淀,淡黄色的,和第一次盐析的胶状感完全不一样,过夜后,离心 ,直得到少量黄色沉淀。
土井挞克树
复溶时间延长一些,然后可以多次复溶离心。
loveliufudan
根据你提供的情况,可能是由于以下原因导致胶原蛋白提取盐析蛋白越来越少:
盐析条件不够优化:盐析过程中,离子强度和pH值的变化可能会影响胶原蛋白的析出。你使用的0.9mol/L氯化钠盐析条件,可能不够优化,无法完全析出胶原蛋白。建议尝试优化离子强度和pH值条件,以更好地析出胶原蛋白。
沉淀的胶状物质并非全部为胶原蛋白:在盐析的过程中,可能会析出其他蛋白质或污染物,而不是胶原蛋白。这些蛋白质或污染物可能会附着在胶原蛋白表面,形成胶状物质。建议通过蛋白质分离和纯化技术,将纯的胶原蛋白分离出来。
盐析过程中出现误操作:在盐析过程中,可能出现误操作,例如盐析液混入杂质、样品处理不当等。建议在操作过程中注意细节,并严格按照实验流程进行操作。
pH值不稳定:在盐析过程中,pH值不稳定也可能导致胶原蛋白析出不完全。建议在盐析前,用缓冲液调整样品的pH值,并在盐析过程中保持pH值的稳定性。
综上所述,你可以尝试优化盐析条件、进行纯化处理、注意操作细节以及稳定pH值等方法,以提高胶原蛋白的析出率。
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