待字闺中85
测铅胶体金竞争法,T线抗原画线浓度为0.5mg/ml(之前划1mg/ml),1μl/cm,T线一直很淡,本来想加浓度,抗体厂家客服说,划线太多消不掉。目前的问题是,T线很淡,要做成10ppb消线,目前只能做到500ppb消线。如果再减少划线抗原的量,阴性样本出线都不明显了。尝试过包被液1%nacl+1%吐温-20+0.5%海藻糖+1%-5%BSA,tris 9.0,BSA多了线就更不明显了。目前用的是万分之一胶体金。10μl/cm喷涂。希望大神帮助。
土井挞克树
不消线可能是因为过量的蛋白可能会封闭某些结合位点,建议换用其他的封闭方式,作对比试验
待字闺中85
胶体金包被过程中采用终浓度1%的bsa封闭,后来考虑到这点,换成0.5%和0.25%,发现没有什么变化,结合依然很弱。划线现在是水稀释。
loveliufudan
针对您的问题,我有以下几点建议:
调整抗原浓度
首先,您可以尝试调整抗原浓度,以增加T线的强度。根据您提供的信息,T线抗原的面线浓度为0.5mg/ml,您之前曾尝试过1mg/ml的浓度,但效果不佳。您可以考虑在0.5mg/ml和1mg/ml之间进行浓度的微调,以寻找最佳的浓度条件。此外,您还可以考虑尝试使用不同的抗原来源或不同批次的抗原,以查看是否会对T线强度产生影响。
调整胶体金浓度和喷涂量
其次,您可以尝试调整胶体金浓度和喷涂量。根据您提供的信息,您目前使用的是万分之一胶体金,喷涂量为10ul/cm。您可以考虑增加胶体金浓度或喷涂量,以增加线的强度。当然,您也需要注意不要过度增加浓度或喷涂量,以避免引起背景噪音。
尝试其他增强信号的方法
最后,如果以上方法无法改善T线的强度,您可以尝试其他增强信号的方法,例如:
尝试其他标记物,例如辣根过氧化物酶(HRP)等。
考虑对抗体进行亲和纯化,以提高其特异性和亲和力。
考虑对样品进行前处理,例如浓缩或分离纯化,以提高其敏感性和特异性。
希望这些建议能够对您有所帮助,祝您实验顺利!
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