竞争法胶体金，不消线
待字闺中85
测铅胶体金竞争法，T线抗原画线浓度为0.5mg/ml（之前划1mg/ml），1μl/cm，T线一直很淡，本来想加浓度，抗体厂家客服说，划线太多消不掉。目前的问题是，T线很淡，要做成10ppb消线，目前只能做到500ppb消线。如果再减少划线抗原的量，阴性样本出线都不明显了。尝试过包被液1%nacl+1%吐温-20+0.5%海藻糖+1%-5%BSA，tris 9.0，BSA多了线就更不明显了。目前用的是万分之一胶体金。10μl/cm喷涂。希望大神帮助。
2 个回答
毛利小五郎的徒弟
不消线可能是因为过量的蛋白可能会封闭某些结合位点，建议换用其他的封闭方式，作对比试验
待字闺中85
胶体金包被过程中采用终浓度1%的bsa封闭，后来考虑到这点，换成0.5%和0.25%，发现没有什么变化，结合依然很弱。划线现在是水稀释。
loveliufudan
针对您的问题，我有以下几点建议：
调整抗原浓度
首先，您可以尝试调整抗原浓度，以增加T线的强度。根据您提供的信息，T线抗原的面线浓度为0.5mg/ml，您之前曾尝试过1mg/ml的浓度，但效果不佳。您可以考虑在0.5mg/ml和1mg/ml之间进行浓度的微调，以寻找最佳的浓度条件。此外，您还可以考虑尝试使用不同的抗原来源或不同批次的抗原，以查看是否会对T线强度产生影响。
调整胶体金浓度和喷涂量
其次，您可以尝试调整胶体金浓度和喷涂量。根据您提供的信息，您目前使用的是万分之一胶体金，喷涂量为10ul/cm。您可以考虑增加胶体金浓度或喷涂量，以增加线的强度。当然，您也需要注意不要过度增加浓度或喷涂量，以避免引起背景噪音。
尝试其他增强信号的方法
最后，如果以上方法无法改善T线的强度，您可以尝试其他增强信号的方法，例如：
尝试其他标记物，例如辣根过氧化物酶（HRP）等。
考虑对抗体进行亲和纯化，以提高其特异性和亲和力。
考虑对样品进行前处理，例如浓缩或分离纯化，以提高其敏感性和特异性。
希望这些建议能够对您有所帮助，祝您实验顺利！
