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免疫胶体金层析技术法检测妊娠

相关实验:免疫胶体金技术

最新修订时间:

简介

人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)是胎盘 合体滋养层细胞分泌的一种糖蛋白,由和促卵泡素(follicle-stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)及促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)具有同源性的 α 亚基和 HCG 特异性 β 亚基组成。HCG 在受精后第 6 天开始分泌,血清浓度在妊娠 8~10 周达到高峰,之后逐渐下降,20 周左右开始稳定并维持至分娩,一般于产后 1~2 周消失。HCG 分子量较小,可通过肾小球从尿中排出。


目前市售的早孕诊断用试纸条,采用胶体金标记免疫层析技术快速检测孕妇尿液中β-HCG,灵敏度高,准确率可达 95%。

原理

免疫胶体金层析技术法检测妊娠的基本原理是在塑料底板上按照由下至上的顺序装配吸尿用玻璃纤维、冻干胶体金标记抗 β-HCG 玻璃纤维、已固定有抗 α-HCG 抗体(鼠多抗,T 线)和羊抗鼠多抗血清(C 线)的硝酸纤维膜,以及硬质吸水滤纸,并用双面胶或其他黏性材料粘接在塑料底板上。装配好的纸板按纵向剪切,裁成宽度为 4 mm 的条状,即为早孕诊断用试纸条(图 2-1)。将试纸条浸人尿液后,由于毛细作用,含 HCG 尿液将沿着玻璃纤维向上移动,形成 HCG 和抗β-HCG(胶体金标记)免疫复合物,并继续向上移行至硝酸纤维膜 T 线位置,形成胶体金标记抗 β-HCG 抗体 -HCG- 抗 α-HCG 抗体(鼠多克隆抗体)双抗体夹心复合物。


由于形成的双抗体夹心复合物大于硝酸纤维膜孔径而在检测带 T 线位置沉积聚集,最终达到肉眼可见的紫红色线条带。多余的胶体金致敏抗体会继续上行至 C 线处,与兔抗鼠 Ig 发生结合形成第二条清晰的紫红色线。无论尿液中有无 HCG,C 线均应出现清晰的紫红色线。


材料与仪器

器材:


胶体金早孕检测试纸


试剂:

妊娠女性新鲜晨尿


步骤

免疫胶体金层析技术法检测妊娠的基本过程可分为如下几步:

A. 将早孕检测试纸的箭头一端插人尿液中(注意尿液不要超过标志线)。

B. 1 分钟左右取出纸条,平放,并在 5 分钟内读取结果。

C. 实验结果及分析

(1)C 线和 T 线位置均出现紫红色线提示怀孕,颜色深浅与 HCG 浓度相关。

(2)仅在 C 线位置出现一条紫红色线提示未怀孕。

(3)C 线位置未出现紫红色线,产品不合格或测试方法不当。

来源:丁香实验

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