外周血提白细胞

在从外周血中提取白细胞时，可以考虑以下几点：

分离白细胞时，应尽可能避免带入红细胞，因为红细胞的存在可能会干扰后续实验的结果。可以采用梯度离心等方法，分离白细胞和红细胞。

在裂解白细胞时，应使用足够的裂解液，使细胞能够充分裂解释放出目的蛋白。可以考虑使用含有蛋白酶抑制剂的裂解液，以避免蛋白酶降解目的蛋白。

如果白细胞量较少，可以考虑进行富集，例如使用免疫磁珠富集目的蛋白，或者采用增加样品量的方式。

在Western blot实验中，可以尝试使用不同的抗体或优化抗体浓度，以提高目的蛋白的检测灵敏度。

另外，还可以考虑使用其他检测方法，如ELISA等，以进一步确认目的蛋白的存在和表达水平。

可以采用流式来提取白细胞，提取效果不错

条带弱的原因可能有以下几个方面：

①. 因为蛋白上样量低或目的蛋白在来源组织或细胞中的表达量并不丰富造成。可适当加大蛋白上样量，也可通过提高抗体稀释度或采用灵敏度更高的发光底物来调整。

②. 蛋白没有充分转移到膜上。转膜后可通过预染Marker判断转膜效率，也可用丽春红染膜、用考马斯亮蓝染胶，判断转膜效率。

③. 抗体效价不高，用量不足，孵育时间太短，或抗体反复使用保存不当而失活。可考虑更换效价更高的抗体，或提高抗体稀释度，延长抗体孵育时间；若怀疑抗体失活，可用斑点杂交实验确定抗体活性。

④. 曝光时间太短。可适当延长曝光时间。