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实验步骤:
(1)样品制备:对于贴壁生长细胞,胰酶消化,调整细胞浓度约1×105/ml,滴加于盖玻片上(置于6孔板中),培养相应时间后,取出细胞爬片,用PBS 洗涤3次。
(2)样品固定:95%乙醇固定20min,PBS洗涤2次,每次1min。
(3)染核:苏木素染液染色2-3min,自来水洗涤。
(4)分色:镜下观察,若细胞核染色过深,用1%盐酸酒精溶液分色数秒,自来水洗涤。
(5)染胞质:浸入伊红染液染色1min,自来水洗涤。
(6)吹干或自然晾干细胞 爬片后,中性树胶封片。
若细胞用4%多聚甲醛固定,则染色时间相应延长,苏木素染色12-15min,伊红5min即可。
土井挞克树
取标本固定后,用he染色试剂盒,二甲苯10min两次,无水乙醇5min两次,然后95乙醇,80乙醇 70乙醇各2min。之后苏木素染色10min,95乙醇浸泡5s,自来水水洗10min,再伊红染色40s,纯水10s,95乙醇2min,无水乙醇2min,二甲苯透明5min两次
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以下是一般肠道HE染色的protocol,供参考:
材料:
1.肠道组织切片
2.1%硫酸铁溶液
3.0.5%氯化钡溶液
4.酒精:70%、90%、95%和100%
5.苏木精染色液
6.伊红染色液
7.脱水剂:丙酮和xylene
8.封片剂
步骤:
1.将切片放入1%硫酸铁溶液中,浸泡5分钟,去除多余的溶液。
2.将切片放入0.5%氯化钡溶液中,浸泡2-3分钟,去除多余的溶液。
3.将切片置于70%乙醇中,浸泡5分钟,然后在90%、95%和100%乙醇中各浸泡5分钟,使其脱水。
4.将切片放入苏木精染色液中,浸泡10-15分钟,直至染色。
5.将切片放入伊红染色液中,浸泡5分钟,直至染色。
6.将切片置于70%乙醇中,浸泡5分钟,然后在90%、95%和100%乙醇中各浸泡5分钟,使其脱水。
7.将切片放入丙酮中,浸泡5分钟,然后放入xylene中浸泡2次,每次浸泡5分钟,以除去丙酮并使其透明。
8.用封片剂覆盖切片,并使用显微镜观察。
注意事项:
1.在操作过程中,保持切片的湿润状态,避免切片干燥和损坏。
2.操作过程中应注意个人防护,如戴手套、护目镜等,以免接触有害物质。
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请问切片是用石蜡切片对吧,肠道取出来要用生理盐水灌洗还是'PBS清洗呢?肠道要切开吗?包埋的时候肠道是直着还是卷着?感谢感谢
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