合作专家 | 郭新容硕士
临床医学 中南大学
审核专家 | 聂壹峰博士
纳米生物医学 中国科学院大学
简介
EVG 染色是一种组织学染色方法,通过使用染色剂染色来突出黑色弹性纤维和红色胶原纤维的存在,比如用于染色动脉粥样硬化弹性纤维的变薄和缺失。染色后,弹性纤维呈现为深棕色或黑色,胶原纤维则呈现为粉红色或红色。
原理
EVG 染色的原理是利用两种染色剂:伊红和苏木素-光亮黄。伊红染色产生红色染色,用于染色胶原纤维。苏木素-光亮黄染色产生黄色染色,用于染色弹性纤维,弹力纤维与染液中间苯二酚的酚基形成氢键而使弹力纤维成蓝黑色。
在染色后,使用酸性酒精使染色剂与组织中的蛋白质结合,弹性纤维呈现为深棕色或蓝黑色,VG 染色作为对比染色,使得胶原纤维则呈现为粉红色或红色。
用途
EVG 染色通常用于检测和定位弹性纤维和胶原纤维等成分,可用于病理学研究中的心脏病、动脉硬化、肝病、肾病等疾病的研究。
(1)可用于区别正常的动脉和静脉及动脉有病变时血管壁各层的情况,如动脉粥样硬化时的各类变化。
(2)可用于区别观察各种疾病对弹性纤维的影响及变化,如高血压主动脉弹力纤维增生。
(3)可用于弹力纤维性瘤病变有大量弹力纤维增生的诊断。
材料与仪器
固定液、组织切片、伊红染色剂
苏木素-光亮黄染色剂、酸性酒精、脱水液
透明剂、显微镜
步骤
1、中性甲醛液固定组织, 石蜡切片, 常规脱蜡至蒸馏水。
2、染色:70% 乙醇稍洗后, 浸入 Victoria Blue』B 染色液中 15 min。
3、95% 乙醇中分化数秒钟。
4、用蒸馏水洗 2 次。
5、复染:用 Ponceau 染色液滴染 5 min。
6、直接用无水乙醇分化与脱水。
7、二甲苯透明, 中性树胶封固。
8、显微镜观察。结果:胶原纤维弹性纤维染成蓝黑色或黑褐色,胶原纤维染成红色,红细胞染成黄色,细胞核染成黑色。
注意事项
(1) 操作时应注意个人防护,避免接触染色剂和有毒化学品。
(2) 操作过程中应注意细胞和组织切片的处理,避免损坏切片。
(3) 操作时间和染色剂的浓度应根据样品的特性和实验需求进行调整,以获得最佳的染色效果。
(4) 在酸性酒精中浸泡时间过长会导致染色剂的脱落,影响染色效果。
(5) 在染色过程中,应避免切片的干燥,同时避免过度浸泡染色剂。
(6) 在使用显微镜观察切片时,应注意调整放大倍数和聚焦,以获取清晰的图像。
(7) 染液使用前要新鲜配制,用不完要弃掉。
来源:丁香实验