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科研学霸天团,48小时有问必答
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二次pcr
loveliufudan
可能有多种原因导致PCR产物暗或者模糊。以下是一些可能的原因和解决方法:反应条件不正确。确保PCR反应体系中的所有试剂品质良好,反应条件正确。如果反应体系中某些试剂的质量差,可以尝试使用新的试剂来重新制备反应体系,如果条件不正确,则可以调整反应温度、时间和引物浓度等参数。降解的DNA模板。如果模板的质量不好,例如DNA受到过度酶解、酸碱条件不佳等等,可能会导致PCR产物的低浓度或者失真。可以尝试使
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问
请问磷酸化不是发生在蛋白修饰阶段吗为什么在文章里看到了磷酸化的引物来进行处在mRNA水平的PCR实验
dxy_mqg1dtg8
我感觉是这篇文章出现的一个错误:1:压根没有pSTAT3这个基因,是怎么设计的引物,我们在文章中常见的检测pSTAT3方法大都是WB,没见过qPCR;2:磷酸化是翻译后的修饰,只发生在蛋白水平,转录水平怎么会出现磷酸化。
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cDNA的保持时间和温度?
huarenqiang5
由RNA逆转录而得到的cDNA在-20°℃一般可以保存2个月左右。
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问
单细胞测序 多样本两组比较分析
loveliufudan
针对单细胞测序多样本的两组比较,您可以尝试使用以下工具和流程:差异基因分析工具:常用的差异基因分析工具包括DESeq2,edgeR,limma-voom等,您可以根据您的数据特点选择适合的工具。这些工具可以识别出在两个不同组别中表达显著差异的基因,从而帮助您了解它们的生物学意义和相关的通路信息。数据预处理:在进行差异基因分析之前,您需要对数据进行预处理,例如,质量控制,过滤低质量细胞和基因,归一化
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问
HBMEC进行OGD/R
loveliufudan
HBMEC细胞OGD/R模型是一种常用的研究缺氧/再氧化(OGD/R)引起的细胞损伤和修复的方法。针对您的问题,缺氧和复氧的时间因实验设计和目的而异,常见的有以下几种方案:缺氧时间:一般为2-6小时,具体时间需要根据您的实验设计和研究问题确定。例如,如果您想研究缺氧对细胞代谢途径的影响,可以选择较短的缺氧时间。如果您想研究缺氧对细胞凋亡和坏死的影响,可以选择较长的缺氧时间。复氧时间:一般为2-24
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问
同一条基因,一样的引物、模板、酶,在同一台pcr仪跑,但是结果如图,之前跑的比较好,今天跑的就很差强人意。
weiran0928
第二天跑的胶图下方引物二聚体明显增多,可能是引物出现了污染或降解,建议更换新的引物,可以用送的引物干粉,加入一定量dd H2O重悬即可,引物管上有说明的。
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实时荧光定量PCR为什么模板浓度高了反而CT值增大了?
毛利小五郎的徒弟
可能是扩增效率低的原因,提高扩增效率
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问
做qPCR时阴性对照水中一直有扩增子是怎么回事
loveliufudan
有几种可能的原因:污染:可能存在污染,即DNA或RNA在实验室环境中存在,进入了试剂或反应体系中。这种情况可能是由于实验室的DNA或RNA污染引起的,或者可能是由于PCR试剂或其他反应组分中存在的污染引起的。在这种情况下,应该检查实验室中所有试剂和反应组分,以查找可能的污染源。假阳性:假阳性是指在PCR反应中出现了扩增信号,但实际上并不存在目标分子。这种情况可能是由于反应物的特异性问题引起的。在这
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关于荧光定量PCR的Ct值的
huarenqiang5
主要考虑以下几点原因:(1)反应的循环数不够:一般要在35个循环以上,但是过多的循环次数可增加背景值。(2)检测荧光信号的步骤有误:SYB-Rgreen法(SG法)采用的是72延伸时采集荧光信号,Taman法则是在退火结束或延伸结束时进行信号采集。(3)引物或探针降解: 可通过PAGE电泳检测其完整性,若是电泳条带呈弥散状,可考虑重新合成引物或探针。(4)模板量不足: 对未知浓度的样品应从系列稀释
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问
请问同一个逆转录试剂盒能够既做小鼠RNA的逆转录又做人类RNA的吗?
loveliufudan
一般情况下,同一个逆转录试剂盒可以用于逆转录不同来源的RNA,包括小鼠RNA和人类RNA。这是因为逆转录试剂盒中的逆转录酶通常是通用的,能够逆转录各种来源的RNA。然而,对于某些特殊的RNA,如长RNA、短RNA、mRNA等,可能需要特定的逆转录试剂盒才能更好地逆转录。此外,逆转录试剂盒的反应体系中也包含了其他辅助试剂,如缓冲液、酶切剂、核酸酶抑制剂等,这些试剂可能会对反应的特异性、效率和准确性产
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问
序列正中间有个polyA尾会影响PCR扩增嘛
毛利小五郎的徒弟
可以分段扩增,把polyA的位置固定在尾侧
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问
pcr,加大模板后,条带亮度没有变化(不怎么亮),这时候要从哪里入手呢?已经跑过温度梯度了,选择了最亮的那个温度。
毛利小五郎的徒弟
从抗体入手,没有亮度考虑是抗体的特异度不够
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问
荧光PCR上板一定得设置复孔吗?
毛利小五郎的徒弟
一定要设置复孔,一般是3个,且需要做三批以上
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用基因组DNA作为模板,对目的片段进行PCr扩增,pcr结果跑胶图如图。这是什么原因呢?要怎么解决
毛利小五郎的徒弟
引物设计有问题,而且pcr过程中存在降解
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请教一下qPCR报错的问题
loveliufudan
该PCR结果中包含了多种错误提示,每个提示都可能有不同的原因和解决方法。以下是一些常见的问题及其解决方法:PRFDROP - Passive reference signal changes near CT:被标记为PRFDROP的孔的被动参考信号在CT附近发生了显著的变化,可能是由于样品或仪器问题导致的。解决方法是检查仪器和实验操作是否正确,并确保样品中的RNA/DNA质量和浓度正常。NOAMP
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qPCR加样方法小技巧
sswei
加样操作方法,以便更好的开展工作。使用流程:拧到需要的量程,装上枪头,然后手握住枪柄,大拇指按住上面的按钮至第一档位,枪头插入试剂液面下,轻轻松开拇指按钮,移出试剂,把枪头插入要加入试剂的管子,拇指按下枪头,为了把枪头里面的试剂残留都打出去,拇指要用力按至第二档位。用过的枪头如果不用了,可以用拇指按住枪顶端的另一个按钮,把枪头打掉,落到废液缸里。 1、加样前,一定要检查吸头是否上紧,以免液体
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转录组数据中的CDS序列可以用于设计引物吗
huarenqiang5
转录组数据中的CDS序列能够用于设计引物。
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目的基因260bp左右,导入19t载体 用M13引物做菌落PCR鉴定,产物应该多大?谢谢
sswei
如果模板序列已知的话,直接将引物序列和模板进行匹配,两条引物之间的DNA片段长度即为目的PCR产物的大小;如果想知道PCR仪反应后的产物大小,可以跑琼脂糖凝聚电泳,照胶仪下根据Marker的指示条带读取产物的大小,或者可以用照胶仪自带的软件直接读出所有pcr产物条带的大小。
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阳性样本FAM通道有值,VIC通道没出,是什么原因?
dxy_rnzkkoz9
把你的基线改一下呢,把1到15个循环拉直了再看。
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问
插入序列与egfp之间序列有很多碱基会引起突变吗
juyue2010
可能会,最好是将中间序列去掉,仅保留少量碱基,
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