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科研学霸天团，48小时有问必答

问引物和CDS区相同还是互补，为什么呢？

红处方567

前向引物相同，后向引物反向互补，为了保证正义链和反义链延伸方向都能按照5'到3'。

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问PCR扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散

genecreate

可能是引物不好，希望可以帮到您！

4 回答659 围观

问PCR如何有效设计引物?

juyue2010

使用引物设计软件，primer5, primer3，或者从文献里查引物

3 回答485 围观

问已知引物序列怎么寻找引物在目的基因中的位置？

毛利小五郎的徒弟

如果引物序列已知直接上基因网站NCBI上输入查询对比即可

3 回答1072 围观

问事先没有设计酶切位点，想把4500bp的片段连接T载体，适合吗

genecreate

可以，片段大难度大一些！！！！

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问求PCR技术应用大全

毛利小五郎的徒弟

1.多重PCR可实现在同一反应管中同时扩增多个不同的片段2. 反向PCR起初设计用于确定临近未知区域的序列。反向PCR有助于研究一个基因的启动子序列；致癌染色体重排如基因融合、异位或转移；及病毒基因的整合。3. 由于序列扩增的产量依赖于模板DNA的量，所以PCR常用于对样品中DNA进行定量，常用的应用是基因表达的定量

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问ABI 7500和Q系列荧光定量PCR仪比较

wikieq

光源：ABI7500 卤素灯光源 Q系列LED光源故7500初始和位移后原则上需要校正光源，光源有试用寿命不及Q系列操作性：7500安装量大培训简单应用广泛老机型性价比高Q系列时尚大方可以单机操作无需电脑

4 回答528 围观

问QP引物设计

bamboopiggy

一般问题不大，只要遵循了qpcr引物设计的原则，并且出来的melt curve是单峰，就可以用

3 回答182 围观

问PCR电泳无扩增条带？

bamboopiggy

你用阳参了么？ 1.扩增的酶有没有问题，2，模板有没有问题，3，加没加引物，4，扩增的程序，尤其是annealing temperature和extension time是否正确？

3 回答94 围观

问qPCR内参基因循环数在多少合适

桂枝柜子

15-30觉得都ok啊，这个还和稀释倍数有关系的呀，稀释倍数太高其他基因跑不出来就不好了

4 回答622 围观

问miRNAqpcr怎么扩成这个样子怎么让线更好点啊

毛利小五郎的徒弟

需要调整基线位置，让线连续上。

2 回答94 围观

问pcr怪物

juyue2010

引物特异性不够，所以条带大小不一

3 回答68 围观

问WGS人全基因组测序

juyue2010

不同版本，按时间排序，有更新。

2 回答127 围观

问不同批次的qPCR结果如何校正？

毛利小五郎的徒弟

至少做三次，然后按照标准曲线差值校正

3 回答543 围观

问qcr 内参跑的很好但是mi RNA曲线跑的很丑

huarenqiang5

1.反应体系污染。2.试剂暴露在强光或高温下导致试剂失效。3.仪器长时间未校准。4.耗材与仪器不匹配。

3 回答75 围观

问qpcr跑出来的结果很奇怪，求解

huarenqiang5

目的基因表达量偏低目的基因引物扩增效率低

2 回答193 围观

问关于剪接体引物设计

juyue2010

在两种剪接体的共有序列上设计引物就可以

3 回答273 围观

问重叠pcr连接长片段(7kb左右)一直做不出来有没有大佬可以请教一下

毛利小五郎的徒弟

在做重叠延伸PCR时，要注意一个关键的问题，如果你用Taq酶话，会在扩增产物的3‘端多一个A尾，如果你其他条件都没问题的话，就要考虑一下是不是这个A尾影响了碱基配对的问题，可以换用平末端酶（如pfu酶）一试。

2 回答362 围观

问pcr 引物一般加多少pmol 模板又加多少量呢

huarenqiang5

引物0.1～1umol（10～100pmol），量以浓度为0.1到0.5μM进行计算。

2 回答188 围观

问如何使对照组的数据归一

huarenqiang5

可以用“Z-score标准化”和“按小数定标标准化”使对照组的数据归一

2 回答123 围观

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