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引物的设计是参照ncbi上已发表的同源基因序列进行的
1-6是1641bp的片段,7-8是1766的片段
土井挞克树
引物设计有问题,而且pcr过程中存在降解
申东熙老伯
非特异性条带多,引物二聚体亮,可以提高退火温度,加一点DMSO去引物二聚体。
loveliufudan
下面是可能导致PCR结果出现问题的一些常见原因:
引物设计不合适:引物可能与模板DNA中的其他序列重复或有一些错配。这可能会导致PCR扩增产物的特异性降低,或者使PCR产物太短或太长。
模板DNA质量不佳:DNA可能已经降解或被污染,这可能会导致PCR产物的数量减少或大小不一。
PCR反应条件不合适:PCR反应条件,如温度、时间和缓冲液成分等,可能不适合特定的PCR产物。这可能会导致PCR扩增产物数量不足或太多。
为了解决这些问题,你可以考虑以下几种方法:
检查引物设计:重新设计引物或修改已有的引物,以确保它们与目标序列特异性高,并且不与其他DNA序列重复或有错配。
检查模板DNA质量:使用质量更好的DNA样本,或者使用DNA提取方法和存储条件以确保DNA质量得到保证。
优化PCR反应条件:尝试不同的PCR反应条件,如温度、时间、缓冲液成分和引物浓度,以找到最适合特定PCR产物的条件。
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