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用基因组DNA作为模板,对目的片段进行PCr扩增,pcr结果跑胶图如图。这是什么原因呢?要怎么解决

相关实验:长片段PCR实验

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dxy_efuv5i55

引物的设计是参照ncbi上已发表的同源基因序列进行的

1-6是1641bp的片段,7-8是1766的片段


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3 个回答

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土井挞克树

有帮助

引物设计有问题,而且pcr过程中存在降解

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申东熙老伯

有帮助

非特异性条带多,引物二聚体亮,可以提高退火温度,加一点DMSO去引物二聚体。

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loveliufudan

有帮助

下面是可能导致PCR结果出现问题的一些常见原因:

引物设计不合适:引物可能与模板DNA中的其他序列重复或有一些错配。这可能会导致PCR扩增产物的特异性降低,或者使PCR产物太短或太长。

模板DNA质量不佳:DNA可能已经降解或被污染,这可能会导致PCR产物的数量减少或大小不一。

PCR反应条件不合适:PCR反应条件,如温度、时间和缓冲液成分等,可能不适合特定的PCR产物。这可能会导致PCR扩增产物数量不足或太多。

为了解决这些问题,你可以考虑以下几种方法:

检查引物设计:重新设计引物或修改已有的引物,以确保它们与目标序列特异性高,并且不与其他DNA序列重复或有错配。

检查模板DNA质量:使用质量更好的DNA样本,或者使用DNA提取方法和存储条件以确保DNA质量得到保证。

优化PCR反应条件:尝试不同的PCR反应条件,如温度、时间、缓冲液成分和引物浓度,以找到最适合特定PCR产物的条件。

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