高GC比模板的PCR扩增
互联网
PCR条件的优化是一个麻烦耗时的过程,涉及到温度、时间、镁离子、引物、dNTP、Taq酶、模板等多个因素的调整。一般来说利用热启动,比如Platinum Taq DNA聚合酶(Invitrogen)可以达到更高的特异性,降低对镁离子浓度的依赖,并且有利于提高“问题模板”的产量。然而,传统的PCR条件优化策略经常对含有稳定二级结构的DNA序列无效,因为这些序列难以变性,并且在退火过程中影响引物与模板的结合,还可能影响到DNA聚合酶的延伸。
作为一种新的PCR添加成分,PCRx Enhancer Solution(Invitrogen)有助于扩增GC丰富序列,解决由于模板问题而造成的PCR扩增困难。该系统可以提高引物结合的特异性和Taq酶的热稳定性,并且便于镁离子浓度和退火温度的优化选择。译者曾经扩增一段GC比70%的序列,可能还有二级结构,用了多个厂家的DNA聚合酶均扩不出条带,改用Platinum Taq DNA聚合酶后,当PCRx Enhancer Solution添加到浓度为3×时得到了很漂亮的结果。
PCR方法相关产品:
- 电泳设备
- 紫外设备
- 普通PCR仪
- 定量PCR仪
-
PCR/RT-PCR/qPCR试剂
-
PCR引物
-
PCR试剂
-
PCR对照
-
特异性PCR试剂盒
-
PCR克隆试剂盒
-
RNA
-
RNase检测/去除
-
RT-PCR试剂
-
RT-PCR标准品
-
定量PCR试剂
-
定量PCR标记
-
总RNA分离纯化盒
-
PCR产物纯化
-
核酸酶
-
聚合酶
-
反转录酶