qPCR加样方法小技巧

加样操作方法，以便更好的开展工作。使用流程：拧到需要的量程，装上枪头，然后手握住枪柄，大拇指按住上面的按钮至第一档位，枪头插入试剂液面下，轻轻松开拇指按钮，移出试剂，把枪头插入要加入试剂的管子，拇指按下枪头，为了把枪头里面的试剂残留都打出去，拇指要用力按至第二档位。用过的枪头如果不用了，可以用拇指按住枪顶端的另一个按钮，把枪头打掉，落到废液缸里。

1、加样前，一定要检查吸头是否上紧，以免液体漏出或取液不准。

2、要保证在整个吸液过程中，吸头尖端要一直处于液面之下，即防止吸空造成吸样不准确。

3、吸取液体完成后排出液体之前，一定要擦去吸头四周的液体，特别是在取液量较少时尤其要注意这一点。但要防止接触吸头尖端。

4、吸取液体和排出液体动作都一定要慢，因为动作过快时，液体因表面张力吸附在吸头壁上，造成移液不准。所取液体的粘度越高，越 应该注意这个问题。

5、排出液体时，在液体将排尽时，要轻轻让吸头尖端接触容器壁，以免在加样的容器中形成气泡，影响后续反应。

6、加样完成后，应在弃去使用过的吸头后，方才松开按钮至起始位置，以免吸头内的残留液体回吸到枪头，造成交叉污染。特别是在进行分子生物学的有关实验时，如进行PCR的加样操作时，由于PCR具有极强的放大能力，如果操作不当使含有DNA的液体标本产生 气溶胶吸附在枪头上，则很容易造成实验中的假阳性。

7、注意使用一次性吸头，避免交叉污染。

一只手加样的时候可以尝试用另一只手扶着

是的，样品加样是影响实验结果的重要步骤之一。以下是一些qPCR加样方法的小技巧，可能对您有帮助：

预先制备样品混合液：在实验开始前，可以预先制备包含所有需要测量的样品的混合液，这样可以确保所有样品在同一时间内接受相同的处理，从而减少实验误差。

使用多通道移液器：使用多通道移液器可以在短时间内快速而准确地加样，减少了实验误差。注意要根据样品数量选择合适的多通道移液器，以避免液体转移时的误差。

注意样品悬浮液的均匀性：样品悬浮液在加样前应充分混合，并确保悬浮液的均匀性。使用振荡器或漩涡器等设备可以帮助混合液体。

加样时缓慢放液：加样时，应缓慢放液以避免产生气泡。气泡会影响反应混合的均匀性，从而导致数据不准确。

避免重复使用微量移液器：避免重复使用微量移液器，因为这会导致液体粘在移液器上，从而影响液体的准确转移。

重复检查加样量：在加样前，应该仔细检查加样体积，并在加样后检查每个孔是否有液体流失。

希望这些小技巧对您有所帮助，能够提高qPCR实验的准确性和可重复性。