普通pcr引物设计和荧光定量pcr引物设计的区别

qPCR为保证扩增效率，产物片段较小，70-250bp,

TM值一般60左右

其他差别较小

普通引物和realtime pcr的引物设计规则差不多，只是在产物大小的区别，realtime pcr产物一般要求在50-250之间吧

它两有以下不同之处:

普通pcr引物设计，引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。产物不能形成二级结构，引物长度在15~30碱基之间。普通RT-PCR是半定量的，即需要从条带的亮度判断量的相对多少。荧光定量PCR是定量，因为两者反应体系，要求有很大区别，引物通常不能通用。除了上面提到的荧光定量PCR产物要控制在60-200nt之间，退火温度也比较高。。一般要达到60度。

设计方法不同1、普通pcr引物设计：引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。2、荧光定量pcr引物设计：通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，标记跟踪PCR产物进行实时监测反应，利用与之相适应的软件对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。