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PCR引物设计

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1111
我设计了一对引物,用几个软件评价不一,哪位高手能否帮我检测一下?PA:ATCAAGCTTCACAGTCAGCCGCATGG
PB:GCTTCTAGACCTCTGGCTGGCTTCTCAC
我的序列:gcccgtacac accgtgtgct gggacacccc acagtcagcc gcatggctcc cctgtgcccc
       61 agcccctggc tccctctgtt gatcccggcc cctgctccag gcctcactgt gcaactgctg
      121 ctgtcactgc tgcttctgat gcctgtccat ccccagaggt tgccccggat gcaggaggat
      181 tcccccttgg gaggaggctc ttctggggaa gatgacccac tgggcgagga ggatctgccc
      241 agtgaagagg attcacccag agaggaggat ccacccggag aggaggatct acctggagag
      301 gaggatctac ctggagagga ggatctacct gaagttaagc ctaaatcaga agaagagggc
      361 tccctgaagt tagaggatct acctactgtt gaggctcctg gagatcctca agaaccccag
      421 aataatgccc acagggacaa agaaggggat gaccagagtc attggcgcta tggaggcgac
      481 ccgccctggc cccgggtgtc cccagcctgc gcgggccgct tccagtcccc ggtggatatc
      541 cgcccccagc tcgccgcctt ctgcccggcc ctgcgccccc tggaactcct gggcttccag
      601 ctcccgccgc tcccagaact gcgcctgcgc aacaatggcc acagtgtgca actgaccctg
      661 cctcctgggc tagagatggc tctgggtccc gggcgggagt accgggctct gcagctgcat
      721 ctgcactggg gggctgcagg tcgtccgggc tcggagcaca ctgtggaagg ccaccgtttc
      781 cctgccgaga tccacgtggt tcacctcagc accgcctttg ccagagttga cgaggccttg
      841 gggcgcccgg gaggcctggc cgtgttggcc gcctttctgg aggagggccc ggaagaaaac
      901 agtgcctatg agcagttgct gtctcgcttg gaagaaatcg ctgaggaagg ctcagagact
      961 caggtcccag gactggacat atctgcactc ctgccctctg acttcagccg ctacttccaa
     1021 tatgaggggt ctctgactac accgccctgt gcccagggtg tcatctggac tgtgtttaac
     1081 cagacagtga tgctgagtgc taagcagctc cacaccctct ctgacaccct gtggggacct
     1141 ggtgactctc ggctacagct gaacttccga gcgacgcagc ctttgaatgg gcgagtgatt
     1201 gaggcctcct tccctgctgg agtggacagc agtcctcggg ctgctgagcc agtccagctg
     1261 aattcctgcc tggctgctgg tgacatccta gccctggttt ttggcctcct ttttgctgtc
     1321 accagcgtcg cgttccttgt gcagatgaga aggcagcaca gaaggggaac caaagggggt
     1381 gtgagctacc gcccagcaga ggtagccgag actggagcct agaggctgga tcttggagaa
     1441 tgtgagaagc cagccagagg catctgaggg ggagccggta actgtcctgt cctgctcatt
     1501 atgccacttc cttttaactg ccaagaaatt ttttaaaata aatatttata at
谢谢
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