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科研学霸天团,48小时有问必答
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PCR扩增10微升可以25微升无条带是为什么?
毛利小五郎的徒弟
上样量太大以后,会加重pcr负荷,导致失败
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问
提取植物内生菌DNA
毛利小五郎的徒弟
可以直接用提取后再分离纯化,也可先分离纯化然后再提取
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问
硫酸铵沉淀
weiran0928
看样子可能是盐浓度过高导致的。这里的80%是指饱和硫酸铵的80%浓度吗,也就是终浓度3.2M?这个浓度是比较高的,建议做个硫酸铵沉淀的浓度梯度,用更小的浓度沉淀更好。一般来说,50%以上差不多就够了。要么就减少上样量。
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问
ZIF8负载核酸
sswei
可能提取质粒的过程中混入了染色体进去。
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问
标尺到底是什么意思?加标尺的标准是什么?如果没有一张加好标尺的标准图片,那我的图片该怎么加标尺呢?
毛利小五郎的徒弟
标尺是一个参考,可以直观的提供样本的计量数据
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问
感受态细胞制备老是出问题?
gyzyxy
刚开始做的话还是建议蓝白斑+抗性筛选。
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问
为什么紫外分光光度法透光率会上升?
sswei
可能存在环境温度异常,强的照明或不稳定环境下工作等情况。
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问
想问一下懂行的大佬,最近在用crisper cas9做基因的片段敲除,敲的是一株产油酵母里的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因。
huarenqiang5
敲除效率受多方面因素影响,建议从以下几点考虑: 1.基因敲除靶点应设计在起始密码子附近(包括起始密码子)或者起始密码子下游的外显子范围内。 2.不同 靶点在基因敲除效率上有较大差异,因此同时设计构建 2~3 个靶点的基因敲除载体再从中选出敲减效果较佳的靶点。 3.N1-N20NGG 靠近 PAM 的碱基对靶点的特异性很重要,前 7~12 个碱基的错配对 Cas
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问
为什么质粒转化涂平板前要离心
毛利小五郎的徒弟
涂板前要离心进行纯化,把杂质去除。
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问
质粒DNA电泳条带异常是什么原因?
loveliufudan
可能有以下原因:DNA质量不佳:DNA质量不佳是导致电泳条带异常的常见原因。DNA质量不佳可能是由于DNA提取不完整、受到污染或降解等问题导致的。模板DNA浓度过高或过低:如果模板DNA浓度过高或过低,也可能导致电泳条带异常。如果浓度过高,可能会出现过度剪切的现象,导致出现长的拖带;如果浓度过低,则可能出现条带弱或消失的现象。酶切不完全或反应时间不足:如果质粒DNA未完全被酶切,或者酶切反应时间不
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问
连接转化菌落验证时,挑单菌落➕10ul水,然后以此为模板跑PCR的话,会不会没挑到跑出来是空的呀,尤其是还想跑温度梯度的
申东熙老伯
挑大一点的单菌落,挑了之后放在培养基里,摇床摇几个小时再做PCR鉴定。跑温度梯度一般是跑的出来的。
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问
大分子片段构建载体总是不成功
huarenqiang5
考虑以下问题:(1)buffer和酶切效率。同样受到内切酶的活力及buffer影响,值得注意的是不同厂家的内切酶一般匹配不同的buffer,所以在设计酶切引物时就应该优先核对buffer问题,同一厂家使用同一种buffer的两种酶酶切时可以同时加入两种酶进行酶切,节省实验时间,同时酶切效率会有所提高。(2)内切酶受到甲基化等因素影响一些限制性内切酶的酶切效率受到甲基化的影响,如MluI受GC甲基化
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问
热蛋白组学实验,在用液氮冻融裂解hepG2细胞后,BCA定量细胞蛋白浓度过低是什么原因呢?
huarenqiang5
主要考虑:1.可能细胞状态不好;2.蛋白与蛋白间性质差异大;3.BCA反应非线性,测定时可能出现偏差,要精度准确,做标准曲线时的点设置多些;4.试剂BCA,一般最低检测限5ug/ml,灵敏度要达到1ug/ml,必须采取加强法测定,比如样品多加几倍。
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问
pet28a质粒dna提取浓度低
毛利小五郎的徒弟
必须增加菌液量,目前来看就是上样量太少了,增加样本量
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乳腺癌细胞相关问题提问
huarenqiang5
MDA-MB-468细胞表达EPCAM。
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问
只有merge后黄色的荧光才能表示共定位吗?
huarenqiang5
这个不一定了,共定位受多种因素影响,共定位从物理角度来看,表示两种或多种颜色荧光分子发出的颜色占据图像中的相同像素。在生物学上,共定位是指两个或多个不同分子位于细胞中的同一结构。 在数字成像的背景下,它可以被描述为多通道图像中的两种或更多荧光染料在空间重叠。共定位对于确定感兴趣结构的位置必不可少,当我们发现某一蛋白在细胞中其重要作用时进一步研究其在何处与何分子结
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关于质粒在细胞中的表达问题
汤姆卜丽波
一般穿梭质粒都是入核的,要不然在细胞质没办法表达,入核之后就是正常的转录翻译了,会有剪接过程
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southern blot转膜的速度和时间怎么把握
龙大人驾到
Southern blot转膜的速度和时间需要根据具体实验情况和转膜装置进行调整。以下是常见的建议和注意事项:转膜速度:转膜速度应该适中,不要过快也不要过慢。过快可能导致样品在膜上分布不均,过慢则可能导致Western转膜液不足,影响转移效果。通常建议转膜速度为10-20毫升/分钟。转膜时间:转膜时间也需要根据实验情况和转膜装置进行调整。通常建议转膜时间为1-2小时,但具体时间可能因实验所需而异。
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质粒双酶切后无条带,目的基因有条带
loveliufudan
过夜12小时后双酶切后质粒DNA没有条带,但是目的基因有条带,这说明质粒DNA在双酶切过程中被消化掉了,而目的基因片段受到保护没有被消化掉。这可能是因为双酶切的条件不适宜导致的,比如酶切反应的时间太长、酶切缓冲液配制不正确、酶的浓度过高或过低等因素都可能影响酶切效率。建议重新评估酶切条件,例如缩短酶切反应时间、尝试调整酶切缓冲液浓度或酶的浓度等,以提高酶切效率。
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问
EMSA只有DNA条带减少但不出现结合条带
王元杰7S75
您好,请问你后面解决了不出现结合带的问题了吗?
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