连接转化菌落验证时，挑单菌落➕10ul水，然后以此为模板跑PCR的话，会不会没挑到跑出来是空的呀，尤其是还想跑温度梯度的

有可能，你这个稀释浓度太大了，应该把样品浓度提高一些

挑大一点的单菌落，挑了之后放在培养基里，摇床摇几个小时再做PCR鉴定。跑温度梯度一般是跑的出来的。

在连接转化菌落验证中，挑单个菌落加水后用作PCR反应的模板，存在一定的风险可能会出现PCR结果为阴性的情况。主要原因是可能存在一些未转化的细胞混杂在挑选的菌落中，从而导致PCR反应失败。

为了尽可能地避免这种情况，您可以尝试增加PCR反应的敏感性。例如，可以在PCR反应体系中增加模板DNA的量，或者尝试使用更高灵敏度的PCR试剂盒等方法。此外，您也可以考虑在PCR反应中使用菌落直接提取的DNA作为模板，以提高PCR反应的成功率。

如果您想要进行温度梯度PCR反应，建议先进行一次常规的PCR反应，以确保模板的质量和PCR反应条件的可行性。如果常规PCR反应结果正常，您可以尝试在此基础上进行温度梯度PCR反应，以寻找最适合的反应条件。