毛利小五郎的徒弟
有可能,你这个稀释浓度太大了,应该把样品浓度提高一些
申东熙老伯
挑大一点的单菌落,挑了之后放在培养基里,摇床摇几个小时再做PCR鉴定。跑温度梯度一般是跑的出来的。
loveliufudan
在连接转化菌落验证中,挑单个菌落加水后用作PCR反应的模板,存在一定的风险可能会出现PCR结果为阴性的情况。主要原因是可能存在一些未转化的细胞混杂在挑选的菌落中,从而导致PCR反应失败。
为了尽可能地避免这种情况,您可以尝试增加PCR反应的敏感性。例如,可以在PCR反应体系中增加模板DNA的量,或者尝试使用更高灵敏度的PCR试剂盒等方法。此外,您也可以考虑在PCR反应中使用菌落直接提取的DNA作为模板,以提高PCR反应的成功率。
如果您想要进行温度梯度PCR反应,建议先进行一次常规的PCR反应,以确保模板的质量和PCR反应条件的可行性。如果常规PCR反应结果正常,您可以尝试在此基础上进行温度梯度PCR反应,以寻找最适合的反应条件。
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