双酶切验证成功，但测序结果显示空载怎么回事？

是不是两个酶切位点距离太近，或者是载体上其他地方还有这两个酶切位点

酶切显示成功而测序是空载说明目的基因片段并没有和载体连接成功，可能是载体出现了自连

pcr产物和质粒DNA酶切后与没有酶切的在同一块胶上电泳，如果两个酶切位点很近，几乎看不到被切下来的小片段条带（太小，早就跑出去了）就会造成空载

可能存在不符合条带大小的情况。可以在原先的那两个酶切位点的外边再找其他两个酶切一下试试。