DNA 实验

在典型的免疫筛选实验中，λ噬菌体表达载体构建的文库应铺在不含异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG) 的大肠杆菌菌株的平板上。诱导物的缺少保证了噬菌斑顺利形成前不产生对宿主有毒性的融合蛋白，2~4 h 后，将平板从 42°C 移到 37°C 以稳定温度敏感型的所有融合蛋白。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

显色底物 X-gal 可与细菌培养物混合，与溶化的顶层琼脂混合后铺于选择性培养板。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

细胞中包含在细胞膜内的内容物。在真核细胞中指细胞膜以内核以外的部分，内含有细胞器和细胞骨架等结构。

利用这一方案可获得剪切好的高质量鲑精担体DNA，它可用于转化实验和其他需要高质量担体DNA的实验中。

本实验主要用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白。

限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶,这类酶的发现和应用可以用于以DNA重组为基础的生物工程技术。

目的DNA片段的回收技术是重组DNA中的关键技术，回收是指从电泳介质中纯化出目的片断。

DNA电泳可用于：（1）分离不同大小的DNA片段；（2）鉴定目的DNA片段；（3）纯化和回收DNA片段。

实验目的是了解掌握检测DNA 质量的方法以及DNA定量的方法；了解影响DNA在琼脂糖凝胶中泳动速率的因素；训练DNA的琼脂糖凝胶电泳操作及DNA的限制性内切酶操作。来源：《遗传学实验教程》

DNA分子是分子生物学研究的基本材料，依不同的实验目的可采取不同的抽提方法获取数量和质量不等的DNA。实验目的是了解植物DNA抽提的主要方法，掌握CTAB法快速抽提水稻DNA。

质粒克隆操作最费时间的步骤是用电泳的方法对预期大小的外源 DNA 片段和质粒 DNA 片段进行纯化，可以用于将质粒和外源 DNA 的连接在低熔点球脂糖存在的条件下完成。

接头是指合成的能够自身互补的 DNA 片段，一般长 8~16 个核苷酸，互补的片段复性后可形成平末端的含有一个酶切位点的双链分子。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

下面的方案描述了鸟枪法测序的起始步骤，从靶 DNA 的剪切到用 M13 噬菌体载体构建 DNA 片段文库，也包括断裂靶 DNA 的两种方法--超声法和喷雾法，以及用 DNA 聚合酶修复片段末端的技术要点。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔。

去除 5' 端的磷酸基可防止质粒 DNA 的自身连接和环化。在体外连接反应中，DNA 连接酶可在邻近的两个分子间形成磷酸二酯键。但只有当一个分子的 5' 端带有磷酸基另一分子的 3' 端带有羟基时，这一反应才能完成。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

氯化锂沉淀法去除质粒制备物中小片段核酸（包括 DNA 和 RNA ) 的原理是基于两种核酸在氯化锂溶液中的溶解度有所不同。氯化锂是强脱水剂，可降低 RNA 的溶解性 ( Hearst and Vinograd 1961a, b），并剥离染色质上的蛋白质（Kondo 1979)。因此，质粒粗提物中的高分子质量 RNA 和蛋白质可在高浓度氯化锂溶液中形成沉淀，从而可通过低速离心加以分离（实例请见Kon

掌握核酸提取与纯化的方法，离心技术的合理使用．酚为有效的蛋白质变性剂，并且饱和的酚与水相有效的分开．因此，在含核酸的样品加入酚，可将样品中的蛋白质变性后形成沉淀层，本实验来源于牡丹江医学院 本科 5 年制检验专业实验指导

常规的质粒 DNA 制备物中都会不同程度地污染有来自宿主菌基因组或质粒断裂碎片的小分子 DNA 或 RNA。尽管它们的分子质量不大，但数量多，会对制备物中 DNA 片段 3' 和 5' 端的总量产生明显影响。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

经过氯化铯梯度离心所纯化的 DNA 中的溴化乙锭可以通过离子交换层析法去除，随后则用乙醇沉淀去除氯化铯。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

欲从经 CsCl 梯度纯化的 DNA 中去除溴化乙锭，常用有机溶剂反复抽提的方法。随后可用透析或沉淀的方法去除 CsCl。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

用含氯化铯和溴化乙锭的悬浮密度梯度离心法分离质粒和染色体 DNA 的方法，取决于与线状 DNA 和闭环 DNA 结合的溴化乙锭的量的差异。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。