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简介
质粒克隆操作最费时间的步骤是用电泳的方法对预期大小的外源 DNA 片段和质粒 DNA 片段进行纯化,可以用于将质粒和外源 DNA 的连接在低熔点球脂糖存在的条件下完成。
来源:丁香实验
操作方法
一、材料1. 酶和缓冲液(1) 2X T4 噬菌体 DNA 连接酶反应混合物:1 mol/L Tris-Cl ( pH 7.6 ) 1.0 ul,100 mmol/L MgCl2 2.0 ul,200 mmol/L DTT 1.0 ul,10 mmol/L ATP 1.0 ul,H2O 4.5 ul,T4 噬菌体 DNA 连接酶 1.0 Weiss 单位。每个连接反应需 10 ul 体系。每次应用