质粒 DNA 的去磷酸化实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

去除 5' 端的磷酸基可防止质粒 DNA 的自身连接和环化。在体外连接反应中，DNA 连接酶可在邻近的两个分子间形成磷酸二酯键。但只有当一个分子的 5' 端带有磷酸基另一分子的 3' 端带有羟基时，这一反应才能完成。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

质粒DNA的去磷酸化实验

一、材料 1. 缓冲液和溶液 EDTA ( 0.5 mol/L，pH 8.0)，EGTA ( 0.5 mol/L，pH 8.0)，乙醇，酚，酚：氯仿（1:1，V/V)， SDS (10%，m/V)，乙酸钠（3 mol/L pH 5.2 和 pH 7.0)，TE ( pH 8.0)，Tris-Cl ( 10 mmol/L，pH 8.3)。 2. 酶与缓冲液小牛肠碱性磷酸酶（CIP) 或虾碱