DNA 片段的回收实验
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简介
目的DNA片段的回收技术是重组DNA中的关键技术，回收是指从电泳介质中纯化出目的片断。
来源：丁香实验
操作方法
一、从琼脂糖介质中纯化DNA片断 1. 用低熔点或常规熔点琼脂糖电泳对PCR扩增片断进行分离，该电泳安常规方法进行，缓冲液为TAE。 2. 在凝胶上，找到所需条带，然后用洁净并灭菌的小刀将其切下接近300微升琼脂糖凝胶 （约300毫克） 3. 如果切下的琼脂糖为高融点的则安下面A步骤进行，如为低融点琼脂，则安B步骤进行。 A. 将300微升琼脂块放进1.5毫升的
微量柱法1. 紫外灯下从胶上切下目的片段，放入一Epphendof管中。 2. 离心管在－20℃冷却5~10分钟。 3. 将微量柱下套上一Epphendof管，将冷却的胶条装进微量柱中，4℃12 000 rpm 离心10分钟。 4. 弃微量柱，用酚/氯仿、氯仿抽提Epphendof管中液体各一次。 5. 1/10体积乙酸钠+2体积无水乙醇沉淀2小时。 6. 70%乙醇洗沉淀，真空干燥，复溶于dd
液氮冻融法1. 紫外灯下从胶上切下目的片段，放入一Epphendof管中。 2. 离心1 min，加入500 ul TE，200 ul 酚/氯仿混匀。 3. 离心管放入液氮中10~15 min，再室温放置，反复冻融。 4. 用酚/氯仿、氯仿抽提Epphendof管中液体各一次。 5. 1/10体积乙酸钠+2体积无水乙醇沉淀2小时。 6. 70%乙醇洗沉淀，真空干燥，复溶于dd水或TE中。
常规方法1. PAGE电泳，如EB染色的则在紫外灯下切下目的片断，如龈染或其他非放染色的则在关下切下目的片断。 2. 用少量脱缓冲液I将目的片断胶条洗至一Eppendorf管中，用玻棒将凝胶捣碎，用150 ul 洗脱缓冲液II将玻棒上的凝胶洗至Eppendorf管中。 3. 振荡后置于37℃3~5小时或过夜。 4. 振荡后离心（10 000 g，10 min），取上清液，并再用200 ul 洗脱缓冲
