筛选构建于 λ 噬菌体载体的表达文库实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

在典型的免疫筛选实验中，λ噬菌体表达载体构建的文库应铺在不含异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG) 的大肠杆菌菌株的平板上。诱导物的缺少保证了噬菌斑顺利形成前不产生对宿主有毒性的融合蛋白，2~4 h 后，将平板从 42°C 移到 37°C 以稳定温度敏感型的所有融合蛋白。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

来源：丁香实验

操作方法

筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库实验

材料缓冲液贮存液、缓冲液及试剂的组分请见附录 1, 贮存液稀释至含适浓度。封闭缓冲液 10mmol/L Tris-Cl(pH8.0) 150 mmol/L NaCl 0.05%(V/V) Tween-20 20%(V/V) 胎牛血淸另外，也可用 5%(V/V) 脱脂奶粉或含 1% 明胶 (m/V) 和 3%(m/V) 牛血清白蛋白的 TNT 缓冲液作封闭缓冲液。至于哪种试剂最好，不同实