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氯化锂沉淀法去除质粒 DNA 制备物中的小片段核酸

实验分类:

DNA 实验

最新修订时间:

简介

氯化锂沉淀法去除质粒制备物中小片段核酸(包括 DNA 和 RNA ) 的原理是基于两种核酸在氯化锂溶液中的溶解度有所不同。氯化锂是强脱水剂,可降低 RNA 的溶解性 ( Hearst and Vinograd 1961a, b),并剥离染色质上的蛋白质(Kondo 1979)。因此,质粒粗提物中的高分子质量 RNA 和蛋白质可在高浓度氯化锂溶液中形成沉淀,从而可通过低速离心加以分离(实例请见Kondo et al. 1991)。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源:丁香实验

操作方法

氯化锂沉淀法去除质粒DNA制备物中的小片段核酸

一、材料 1. 缓冲液和溶剂 乙醇,异丙醇,LiCl ( 4 mol/L),乙酸钠(3mol/L, pH 5.2),TE ( pH 8.0),含有浓度为 20 μg/ml RNase A 的 TE ( pH 8.0)。 2. 核酸和寡核苷酸 DNA 样品,CsCl 密度梯度离心纯化。 3. 离心机和转子 Sorvsll SS-34 转子或性能相同的替代转子 二、方法 1. 测定质粒

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