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简介
用含氯化铯和溴化乙锭的悬浮密度梯度离心法分离质粒和染色体 DNA 的方法,取决于与线状 DNA 和闭环 DNA 结合的溴化乙锭的量的差异。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。
来源:丁香实验
操作方法
一、材料 1. 缓冲液和溶液 CsCl ( 固体),CsCl 再分带溶液,乙醇,溴化乙锭 ( 10 mg/ml ),石蜡油 2. 核酸和寡核苷酸 粗制质粒 3. 离心机和转头 Sorvall SS-34 转头或相当的转头,超速离心机转头(最好为垂直式)和离心管 (如果离心时间不是限制因素,可用 Beckman Vti65、角度转头 Ti50、Ti65、Ti70 或 Sorvall 的
不连续梯度法一、材料 1. 缓冲液和溶液 CsCl ( 固体)(用于三级不连续梯度的 CsCl 液层),溴化乙锭(10 mg/ml ),TE ( pH 8.0)。 2. 核酸和寡核苷酸 粗制质粒样品 每个梯度的 DNA 用量宜来自不超过 50 ml 过夜培养物的粗制质粒。来自 100 ml 培养物的粗制质粒样品则应重溶于约 0.9 ml TE(pH 8.0)中,从而在两个不连续梯度之间足以形成一