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氯化铯密度梯度离心纯化轮状病毒

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文喻玲,赵庆欢,于 洋,陈元鼎

[摘要] 纯化是研究病毒理化特性、 生物 学和免疫学特性的重要步骤和要求。在纯化病毒的方法中,氯化铯(CsCl)密度梯度离心法是较为常用的方法之一,方法简便易行,获得的病毒样品较纯。本文报道一种轮状病毒(RV)的CsCl密度梯度离心纯化方法,在离心前用聚乙二醇(PEG 6000)浓缩得到的病毒增殖液中加入56%CsCl,使其成为均匀混合液,经水平转头密度梯度离心后,可以将病毒分成3条乳白色区带。在密度梯度离心前,病毒样品是否用三氟三氯乙烷抽提,结果也有差别。经SDS-PAGE、Western、病毒的感染性滴度测定结果表明,所纯化的病毒具有较高的纯度和很好的回收率。

[关键词] 氯化铯;密度梯度离心纯化;轮状病毒;三氟三氯乙烷

Purification of rotavirus by CsCl gradient centrifugation

WEN Yu-ling,ZHAO Qing-huan,YU Yang,et al.Institute of Medical Biology,Chinese Academy Medical Sciences & Peking Union Medical College,Kunming 650118,China

[Abstract] Objective Purification is an important procedure in study on virus physical and chemical properties.Among them,CsCl density gradient centrifugation is often used,because product purity is good by this method.This paper described a method to purify rotavirus from cultural medium by means of CsCl gradient centrifugation.Methods The purified virus samples were further determined by means of SDS-PAGE,Western Blot,and antigenicity detection.Results The results showed that this is a good method with a good purity and recovery rate,and purification were affected 1.1.2-Trichloro-Trifluoroethane extraction before centrifugation.Condusion Good purity and recover’y rate could be obtained by the method.

[Key words] CsCl;density gradient centrifugation;rotavirus purification;1,1,2-Trichloro-Trifluoroethane

A组轮状病毒(rotavirus RV)是婴幼儿病毒性腹泻的主要病原体,全世界每年5岁以下死亡的儿童中,因RV感染而腹泻致死的约有60万人[1]。另外,许多动物和禽类也感染RV[2]。所以RV不但威胁到人类的健康,也严重影响了畜牧业的发展。

RV是具有三层同心圆结构的二十面体,基因组由分为节段的11条双链RNA片段组成,分别编码6个结构蛋白(Vp1、Vp2、Vp3、Vp4、Vp6、Vp7)和5个非结构蛋白(NSP1、NSP2、NSP3、NSP4、NSP5)[3]。其中,Vp6约占病毒蛋白的51%,是RV的主要抗原蛋白[4]。

电子显微镜下,感染宿主的RV可见3种类型的病毒颗粒。完整的病毒颗粒为球形,直径75 nm,无包膜[5]。普通电镜下,病毒的核衣壳呈双层。外层光滑,内层的壳粒排列成放射状。低温电镜下,该种颗粒的核衣壳实际上有三层,含有结构蛋白Vp1~Vp7,具有感染性。

除完整颗粒外,粪便中还可见单、双层颗粒,其颗粒的表面粗糙,不含Vp4和Vp7,不具有感染性[6]。

本研究用CsCl梯度离心的方法成功获得了三层病毒、双层、单层病毒的颗粒,并分析了三氟三氯乙烷对氯化铯密度梯度离心纯化轮状病毒所造成的影响,为进一步研究RV的结构和功能提供了技术平台。

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