氯化铯法
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原理
提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
材料与仪器
细菌
溴化乙锭 氯化铯 丁醇
离心机 巴斯吸管 摇床
溴化乙锭 氯化铯 丁醇
离心机 巴斯吸管 摇床
步骤
1. 培养100 ml 细菌培养物至饱和状态，用JA-20转子4 000 g 离心10 min。
2. 用9.5 ml 的TE缓冲液重悬沉淀。
3. 加0.5 ml 10%的SDS和50 ul 20 mg/ml 的蛋白酶K，混合，于37℃温育1 h。
4. 加1.8 ml 5 mol/l NaCl，充分混合，加入1. 5 ml CTAB/NaCl溶液，混合，于65℃温育20 min。
2. 用9.5 ml 的TE缓冲液重悬沉淀。
3. 加0.5 ml 10%的SDS和50 ul 20 mg/ml 的蛋白酶K，混合，于37℃温育1 h。
4. 加1.8 ml 5 mol/l NaCl，充分混合，加入1. 5 ml CTAB/NaCl溶液，混合，于65℃温育20 min。
5. 加等体积的氯仿/异戊醇抽提，室温下6 000 g 离心10 min，用宽口吸管将上清液转移至新管中。
6. 加化6体积的异丙醇，轻轻混合直至沉淀下来，用一个封口的巴斯德吸管将沉淀转移至70%乙醇中冼涤。
7. 10 000 g 离心5 min，弃上清，用4 ml TE缓冲液重悬沉淀。
8. 用分光光度计检测DNA的浓度，将其调节到50~100 ug/ml。
9. 每4 ml 缓冲液加人4.3 g CsCl，并使之溶解，加入200 ul 的10 mg/ml 的溴化乙锭。
10. 转移至4 ml 快封口离心管中，调节体积，用TE缓祌液配制的CsCl平衡离心管，封住管口。
11. 用VTi80转子于15℃，以420 000 g 离心4 h或 250 000 g过夜。
8. 用分光光度计检测DNA的浓度，将其调节到50~100 ug/ml。
9. 每4 ml 缓冲液加人4.3 g CsCl，并使之溶解，加入200 ul 的10 mg/ml 的溴化乙锭。
10. 转移至4 ml 快封口离心管中，调节体积，用TE缓祌液配制的CsCl平衡离心管，封住管口。
11. 用VTi80转子于15℃，以420 000 g 离心4 h或 250 000 g过夜。
12. 在长波紫外灯下观察梯带，用15号针头和3 ml 塑料注射器移出条带。
13. 用CsCl饱和的异丙醇或水饱和的丁醇离心抽提，以除去溴化乙锭。
14. 在2 L TE缓冲液中透折过夜以除去CsCl，如果必要，沉淀DNA并重新溶解至所需要的浓度。
13. 用CsCl饱和的异丙醇或水饱和的丁醇离心抽提，以除去溴化乙锭。
14. 在2 L TE缓冲液中透折过夜以除去CsCl，如果必要，沉淀DNA并重新溶解至所需要的浓度。
来源：丁香实验
