小量制备
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原理
提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
材料与仪器
细菌
TE 氯化铯 溴化乙锭 NaCl 乙醇 CTAB
离心机 摇床
TE 氯化铯 溴化乙锭 NaCl 乙醇 CTAB
离心机 摇床
步骤
1. 培养5 ml 的细菌培养物至饱和状态，取1.5 ml 的培养物离心2 min。
2. 沉淀物加入567 ul 的TE缓冲液，用吸管反复吹打使之重悬。
3. 加入30 ul 10%的SDS和3 ℃ 20 mg/ml蛋白酶K，混匀，于37℃温育1 h。
2. 沉淀物加入567 ul 的TE缓冲液，用吸管反复吹打使之重悬。
3. 加入30 ul 10%的SDS和3 ℃ 20 mg/ml蛋白酶K，混匀，于37℃温育1 h。
4. 加入100 ul 5 mol/l NaCl充分混匀，再加入80 ul CTAB/NaCl溶液，混匀，于65℃温育10 min。
5. 加入等体积的氯仿/异戊醇，混匀，离心4~5 min将上清液转人一个新管中，如果难以移出上清，先用牙签除去界面物质。
6. 加入等体积的酚/氯仿/异戊醇，混匀，离心5 min，将上清液转入一只新管中。
7. 加入0.6体积异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，用一个封口的巴斯德管将沉淀转移至1 ml 的70%乙醇中洗涤。
8. 离心5 min，弃上清，用冻干机稍加干燥，重溶于的下100 ul TE缓冲液，每次酶切反应用10~15 μl。
来源：丁香实验
