实验问答4,386,706 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问问题求解答！！！急急急急！！

麻黄连翘赤小豆

跑蛋白时间久一些，我跑凋亡通路的磷酸化蛋白都是相近的蛋白，都能跑出来，自己制胶会好一些

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问S1-PFGE 哪位大神可以告诉我是什么原因导致条带这个样子吗？

bamboopiggy

是不是你的s1坏了，换个s1试试。

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问ELISA检测细胞8-OHdG

容若自有容若殇

小心收集上清液，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

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问细胞代谢对于识别目的基因、蛋白质和表型很重要吗？

小小小小小芳

研究者控制酵母细胞中主要代谢产物的水平，并探索这种改变对基因的行为和基因表达产物的影响。结果显示，细胞代谢改变能影响大约百分之八九十的基因的行为及其产物的表达。 “细胞代谢对细胞本身起到的作用远比我们之前认为的更加重要”，马库斯博士解释说，“细胞摄取的营养物质能影响几乎所有的基因。事实上，在许多情况下，这样的影响效果非常明显。改变细胞的代谢可能会完全改变基因的表达。传统的观点认为，由基因来控制营养

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问CO-IP实验中，IGg组有条带，IP抗体是兔源的，WB抗体是鼠源的，二抗是经过预吸附处理的二抗。

小小小小小芳

样品被蛋白酶降解，处理方法：添加蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)；所有操作保持4℃以下冰上操作并防止冻融。抗体浓度太低，处理方法：调整IP和/或IB抗体浓度，必要时设立浓度梯度，摸索最佳浓度；抗体亲合力太低，处理方法：选用适合于IP和/或IB的相应抗体；IP抗体未与agarose珠子结合，处理方法：选用适合于IP的相应珠子，正确保存防止变质或干燥；Tag未暴露在融合蛋白构象

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问又是自闭的一天，怎么回事?真的走一步一个坑

小小小小小芳

看样子是“反影”现象,可能是信号太强,就像是照相的时候曝光过度了,建议提高一抗和二抗的稀释倍数,缩短抗体孵育时间,如果是用ECL化学发光液的话换成低敏的会改善这种现象

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问急！！！求助：ELISA试剂盒测定细胞培养上清中的酪蛋白浓度，为什么含血清比无血清浓度更低？

小小小小小芳

包被抗原的浓度较小，阳性血清中抗体量大于包被抗原的量而出现钩状效应（后带效应），见意将阳性血清做一下浓度曲线看一下，或者采用棋盘滴定或单项滴定重新确定包被抗原浓度

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问跑了大半个月，IRF3只跑出过一次，这是抗体有问题吗？内参还算可以？

Eason老歌迷

没看出来有条带，你转完膜封闭可以用丽春红染色看一下有没有条带，或者你延长一下封闭时间，背景太脏。

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问请问用酶联免疫试剂盒检测细胞培养上清的酪蛋白浓度，如果样本OD值低于标准曲线最低浓度的OD值会怎么样？说明检测结果不准确吗？

Eason老歌迷

你只做了一次实验吗？可以多做几次重复实验。一般标曲OK，试剂盒基本没有质量问题，这个时候先去分析样品和保存方法的原因。建议用新鲜样品检测，将标准品稀释后加入血清或血浆中检测（也就是血清进一步稀释标准品），观察检测结果，判断是否是血清中有未知物质影响。

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问小白想问问各位老师WB实验中内参是在每个泳道中都加吗，还是其他

简简单单的8872

不需要单独加，同一个样品中同时检测内参蛋白和目标蛋白

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问我的目的带很弱，如何加强？

HD8023

这种情况下可以加定量或者一抗浓度。

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问背景有黑色斑点或有不均匀的白色斑点以及暗背景上白色带，是什么原因导致的？

bamboopiggy

1.背景黑斑一般是抗体不特异。2，不均匀的白色斑点可能是封抗体的时候，气泡没有赶好，3，暗背景白色条带，可能是蛋白量太高，烧心了。

5 回答104 围观

问无蛋白质的区域具有高背景

HD8023

如果是所有的条带都这样，就是封闭的不好，如果是有的没有，就是抗体的饿特异性不好。

6 回答59 围观

问有什么办法可以提高蛋白提取浓度？

默然前进前行

用水提取蛋白质时,还应考虑盐的浓度、PH、温度等因素。如:PH 溶液PH影响蛋白质的溶解度和稳定性,蛋白质提取溶液的PH应首先在保证蛋白质的稳定范围,选择偏离等电点两侧的某一点,以增大蛋白质的溶解度,提高提取率等。

5 回答108 围观

问求分析wb条带问题

dxy_3jhqelx7

可能是杂带，可以尝试封闭时间久一点，洗条带时间长一点

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问求蛋白纯化和测序方面的书籍名字作者

大草原的小灰驴

Terry SpeedMichael S. WatermanKeith R. Mitchelson R R 伯吉斯马文丽宋艳斌

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问求助 MALDI-TOF检测BSA衍生物总是测不到信号

Eason老歌迷

我做过这个反应，不同物质的化学位移不同。我的化合物中NHS中两组氢的化学位移是4.02氘代氯仿做溶剂。我做的这个反应都是搅拌过夜的，反应要求无水，我用的是重蒸试剂，你换个重蒸试剂看看，再安全点可以无水无氧。确定试剂和溶剂都没问题就没问题了。

2 回答127 围观

问求助皮肤组织提蛋白方法

dxy_k8787d2r

推荐低温匀浆器，皮肤匀浆大概是每次60s，四次，60hz，充分匀浆后会更好裂解

4 回答295 围观

问[求助]用ELISA测血浆中TfR1（转铁蛋白受体1）

大草原的小灰驴

首先楼主应该严格区分血浆和血清的概念。血浆是指抗凝血离心后得到的上清液，含有纤维蛋白和抗凝剂成分，比如紫帽管为EDTA-K2;蓝帽管为枸橼酸盐，绿帽管为肝素。而血清为促凝管或者不含有促凝物质的采血管离心后的上清，不含有纤维蛋白，比如红帽或者黄色、橘黄色管。其次，您需要确定血清和血浆内有差别的成分是否与ELISA 试剂反应，可以用同一人的不同标本类型做实验对比一下。另外，标本的脂血、乳糜血以及溶血等

3 回答98 围观

问求助 | Ficoll密度梯度离心法分离PBMC 在离心管底出现细胞膜吹不开

大草原的小灰驴

把血液加入淋巴细胞分离液一步非常关键，必须要保持液面的平衡，要将离心管口45度倾斜，然后以非常慢的速度，一滴一滴的靠着离心管内壁加进去，慢慢的加入几滴形成一个界面，全过程需要很稳定的手法。1、初始PBMC估计1毫升可以分出来100万个细胞。常规5 ml外周血可以分到undefined10^6-undefined10^7 cell，按照自己所需确定外周血体积。2、分离液与稀释后的血液比为1：2。外周血获得后进行密度梯度离心，最

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