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免疫沉淀实验,电泳后考染/银染,BSA粉末是否有背景干扰
毛利小五郎的徒弟
会有背景干扰,粉末有时候溶解不足就会产生背景干扰
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问
重链曝不出来目的条带却能曝出来
毛利小五郎的徒弟
可能的原因有 3 个: 1)一抗效价不好。 2)抗原太稀。 3)封闭时间过长。解决的方法: 1)换用一抗或增加一抗用量。 2)增加抗原浓度。 3)缩短封闭时间,封闭时间一般 37 摄氏度 3 个小时,或者 4 摄氏度过夜。不能比这个更长了。
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问
蛋白免疫印记实验中,无蛋白的区域具有高背景,洗涤非常充分,孵化温度也比较合适,会是什么原因
毛利小五郎的徒弟
可能是封闭液的原因,封闭液的浓度偏低,封闭时间过短,导致封闭不彻底,抗体与酶标板孔结合,也可能导致无蛋白区域背景偏高。
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问
Elisa实验结果白板,对照不显色,咋办呀?
huarenqiang5
考虑以下几点原因:1.将终止液当做底物或者酶结合物使用2.洗涤液桶受到污染,有YZ酶活性的物质存在或者蒸馏水受到污染。
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问
Elisa实验中,结果空白背景高,一般是什么原因?
huarenqiang5
常见原因如下:1)洗板不干净;2)显色液变质或者试剂过期;3)试剂稀释有误,如加酶的浓度过高;4)蒸馏水受酶等污染;5)试剂混用;6)培养箱温度超过37℃或反应时间过长。
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问
想问一下大佬们,我要测一个放线菌的分泌蛋白的表达量,
sswei
可以采用散射比浊法来测定分泌蛋白的量。
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问
在测量多糖中蛋白质含量时,是否可以使用BCA测量,对比使用Bradford法哪种方法更适合,为什么?
loveliufudan
BCA和Bradford法都是常用的蛋白质测量方法,但是它们对多糖的干扰程度不同。通常情况下,多糖会干扰Bradford法的测量,导致高估蛋白质含量。而BCA法对多糖的干扰相对较小,更适合测量多糖中蛋白质的含量。因此,如果需要测量多糖中蛋白质的含量,建议选择BCA法进行测量。但是,如果待测样品中没有多糖的干扰,Bradford法也可以使用。需要根据具体情况选择合适的方法。
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问
western blot免疫印迹实验,目的带很弱,要怎么加强
毛利小五郎的徒弟
增强上样浓度和上样量,延长一抗孵育时间
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问
Elisa实验中无法检测出弱阳性质控的样本,是由于什么原因造成的?
loveliufudan
可能有以下几个原因:抗原过少:如果样品中的抗原浓度过低,可能会导致无法检测出弱阳性结果。在这种情况下,可以尝试增加样品的浓度或者使用更敏感的检测方法。洗涤不彻底:洗涤步骤是Elisa实验中非常重要的一个环节,如果洗涤不彻底,可能会导致样本和检测试剂之间的非特异性结合,从而产生高背景信号,影响结果的准确性。建议仔细检查洗涤步骤是否正确执行。抗体浓度不足:如果使用的抗体浓度过低,可能会导致检测的灵敏度
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问
Wb上样浓度应该选择多少?
balalaLy
应该是看蛋白量吧,一般20ug总蛋白就可以了
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问
Western blot 总是出现固定的一条强杂带
balalaLy
有些抗体会出现杂带是正常现象,但是你这个普遍都有而且位置差不多,应该就不是一抗的问题,换一个二抗试试
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问
最近遇到了小鼠免疫问题
huarenqiang5
主要考虑可能是PH问题导致。确保抗原溶液本身 pH 在 5-9 之间,从而与佐剂混合后可以被缓冲至中性。
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问
酶放大免疫实验技术
huarenqiang5
荧光标记技术:是把荧光基团的共价键连接到蛋白、核酸等能够识别分子物质上的一种技术。目前有新型的一种免疫荧光信号放大技术标记方法是荧光标记技术中的一种。
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问
Wb显影结果很糊是什么原因啊?
毛利小五郎的徒弟
抗体特异性差的原因,造成了非特异性染色,建议更换特异性高的抗体
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问
wb跑胶的时候内槽的电泳液老是漏是怎么回事?
毛利小五郎的徒弟
漏液多是因为电泳槽老化密闭性差的缘故,建议更换电泳槽
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问
做wb的时候,全膜可以一起孵育抗体吗,怎么稀释抗体?
毛利小五郎的徒弟
可以一起孵育抗体,在不同的区域,不会互相影响
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问
为什么ip之后要跑胶做银染呢?
loveliufudan
在免疫沉淀(IP)实验中,我们使用抗体将目标蛋白质与其相互作用的其他蛋白质一起沉淀下来,然后通常需要对沉淀物进行分析以确定哪些蛋白质与目标蛋白质发生了相互作用。这个分析的方法通常包括Western Blotting(WB)和银染分析。银染和WB的最大区别在于它们使用的检测方法不同。WB主要通过特定的抗体来检测目标蛋白质及其相互作用的其他蛋白质。而银染则是通过银离子化学反应的方式,将沉淀下来的蛋白质
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问
southern blot应该如何定量?
huarenqiang5
用含溴化乙锭的1%琼脂凝胶电泳法测定,根据加入标准品片断的电泳迁移距离计算样品片断分子量大小。
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问
不知道WB中这些斑块产生的原因和解决办法,求
三岁就爱笑的丫头
看起来特别像加样时样本飘了的痕迹,但出现在最终的条带上,可能是有气泡正好在那个位置,那就下次记得把气泡赶走。如果是第一次跑,可以在分析下上样量以及其他问题,多试试
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问
乙肝表面抗原ELISA方法检测弱阳性的处理方法
毛利小五郎的徒弟
除了化学法,还可以做免疫荧光实验,看抗原的表达强度,来检测阳性的强弱
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