Western blot 总是出现固定的一条强杂带

一般由于一抗的特异性不好所导致，目的带比杂带信号弱，在不减低一抗的稀释比例的前提下，缩短杂交时间；并提高TBST缓冲液的NaCl的浓度提高到500 nM

有些抗体会出现杂带是正常现象，但是你这个普遍都有而且位置差不多，应该就不是一抗的问题，换一个二抗试试

这种情况可能是由于抗体特异性不够，导致与非目标蛋白结合形成了杂带。建议您检查您使用的抗体是否特异性良好，可以尝试使用其他来源的抗体或者进行免疫印迹前的蛋白质免疫沉淀等步骤，以提高目标蛋白的纯度和特异性。此外，还要检查实验操作过程中是否有出现污染或其他技术问题导致非特异性结合。最好做阴性对照，排除假阳性的可能性。

这条杂带考虑是稳定的代谢产物或者是你样品的降解，或者是你体系内的污染。