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wb结果为什么背景比较黑且条带不清晰?

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dxy_xextz7w2


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6 个回答

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dxy_2lxxu4h6

有帮助

蛋白样品质量差:目标蛋白表达量低,提取效率低,或含有较多的干扰物

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huarenqiang5

有帮助

考虑以下几点原因:

1.膜污染

2.曝光时膜上发光液不足

3.封闭时间不够

4.封闭液不合适

5.TBST被污染

6.洗涤不彻底

7.抗体浓度可能过高

8.抗体和封闭剂之间的交叉反应

建议按以下几点处理:

1.使用干净的镊子并戴上手套操作,以防止膜污染。

2.使膜充分浸在发光液中

3.增加封闭孵育时间

4.换其他封闭液(5%脱脂奶粉、5%BSA)

5.使用新的TBST

6.增加洗涤时间和洗涤缓冲液的体积

7.降低一抗或二抗的浓度

8.用TBST配制抗体和封闭液,吐温可以减少交叉反应。

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NatureBios

有帮助

背景黑封闭和清洗延长时间,条带不清晰转印多加一张滤纸和延长20min

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whilt-shirt

有帮助

封闭不完全,抗体特异性不好或者TBST清洗时间过短

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loveliufudan

有帮助

Western Blotting(WB)的背景比较黑且条带不清晰的原因可能有很多。以下是一些常见的可能原因:

过度染色:如果样品中的蛋白质含量较高,可能会导致过度染色,使得背景变黑且条带不清晰。建议优化染色的时间和浓度,避免过度染色。

组织破碎:如果组织破碎不完整,可能会导致蛋白质在膜上扩散或形成模糊的条带。建议在制备样品时加入足够的保护剂和蛋白酶抑制剂,避免蛋白质的破坏和降解。

次要抗体问题:次要抗体可能存在污染或交叉反应,导致背景比较黑。建议使用高质量的次要抗体,确保其特异性和纯度。

蛋白质不纯:如果样品中存在其他蛋白质,可能会导致背景比较黑。建议使用高纯度的蛋白质样品,避免其他蛋白质的干扰。

转印问题:如果转印条件不合适,可能会导致蛋白质的扩散和条带模糊。建议优化转印条件,确保蛋白质可以均匀地转移到膜上,并避免过度转印。

综上所述,要解决WB背景比较黑且条带不清晰的问题,需要仔细检查每个步骤,并根据具体情况进行优化。

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balalaLy

有帮助

一抗二抗浓度高,或者洗膜不充分,适当调低抗体浓度,增加洗膜时间,或者提高洗膜液中tween20的浓度

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