WB 实验，你都碰到过哪些奇葩的条带

相信很多人在做 Western blot 实验时，会遇到各式各样奇怪的现象，为了让大家少走弯路，下面就跟大家来分享一下实验过程中会出现哪些现象，是什么原因，如何来解决。

以下列举的情况可都是我们的实验员在多次实验中所积累的真实经验，内容文字少，全是干货。

1. 出现黑点或黑斑

原因：试剂污染，抗体结合到封闭剂

解决方法：使用新鲜配置的试剂；过滤封闭液；选用其他类型封闭液

2. 条带中出现边缘规则的白圈

原因：转膜时膜和胶中间有气泡，或抗体在膜上未均匀分散

解决方法：制备转膜凝胶时用玻棒赶去气泡；使用摇床孵育抗体

3. 条带拖尾

原因：样品有未溶颗粒；分离胶浓度偏大

解决方法：充分溶解，加样前离心；换小浓度分离胶

4. 条带扭曲，如微笑带

原因：胶未配好（凝胶未能完全聚合，胶中有颗粒或气泡，凝胶未冷却好，）；电压过高；

解决方法：正确添加质量合格且未过期的 AP 及 TEMED；过滤配胶的试剂保证配胶过程中胶内无气泡；凝胶冷却好后再上样；降低电压

5. 出现非均一性背景

原因：膜可能曾经干过

解决方法：在实验过程中要保证膜一直处于湿润状态

6. 条带中间出现白色（反白）

原因：中心部位高浓度 HRP 将底物消耗过快，中间部位底物消耗完后无法发光

解决方法：降低蛋白量，降低一抗与二抗的浓度

7. 高背景

△ 调整一抗浓度

8. 非特异性条带（杂带）

另外，有些情况下的「杂带」带可能并不杂，例如

翻译后修饰对分子量的影响：