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做 wb 实验时,样本如何精准上样?

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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材料与仪器

蛋白样品、移液枪;

步骤

1、提取时冰上操作,buffer 添加蛋白酶抑制剂;

2、蛋白尽量同一批次提取、测定浓度,保存及使用情况尽量一致,防止部分样品有降解;

3、蛋白提取后尽快测定浓度,添加标曲;

4、最好调整为统一浓度后上样体积保持一致;

5、每孔上样体积不宜过大或过少,不超过最大上样量,避免样品溢散污染;

6、由于样品有一定粘滞性,枪头吸液后外壁会黏附一些,加样时需注意,使用长而细的枪头;

7、相比等体积上样,如果可以,尽可能等蛋白量上样。

来源:丁香实验

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