WB 同一批次蛋白跑出的条带为何不一致

WB，又叫蛋白质免疫印迹，是很常见单很重要的一个分子生物学实验。然而，大家常常会遇到各种问题，特别是新手，有时候不知道如何下手，学霸君汇总了一下。欢迎大家来一起交流共同进步。

chengxue727 ：

每次提蛋白后会将样品在短时间内重复 2-3 次 WB，但是每次跑出的条带趋势不一致，上样量和其他条件都没有变，内参基本是整齐稳定的，不知道为什么目的条带就是不一致？求解。

dxymuchong：

内参稳定说明上样量稳定（应该大致是一样的），所以不存在什么上样量不一样的问题；出现这样的结果，问题出在每一步都有一定的可能性，比如电泳，转膜，敷抗体，显色等等。但据我所知，WB 最关键的还是转膜和敷抗体步骤，可能是你敷抗体的时候敷的不均匀。我的建议是你再认认真真，仔仔细细做几遍，很可能重复性就做出来了。只是个人观点。

200210lee ：

楼主最好上图，看下条带情况。听口气楼主应该是老手了，基本操作的问题我们没必要去考虑。我认为问题的关键在于成像的过程。同一张膜，本人可以在成像的时候，做出完全不同的图片结果。显色液的滴加，量，以及曝光时间，条带颜色（要求灰色而不是黑色）。所以最好有图片说明问题。

无名冷雨 ：

这个问题我以前在做 western blotting 的时候也遇见过，楼主说是内参一致，而目的条带每次都不一样，我想说原因可能是在显影液环节，简单来说就是你的膜没有淋干净，上面残留参差不齐的 T/TBS，T/TBS 能稀释显影液，目的条带本来表达量就少，某一个点残留的 T/TBS 稍微多一点就可能导致显影效果下降，所以建议在显影液反应前，尽量将膜上的洗膜液淋掉（当然也不能让膜干了，要是实验室富裕的话，也可以多添点显影液，效果一样），希望对你有帮助。