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为什么同一批次提取蛋白跑出的条带不一致？
chengxue727
做这个实验的时，我同一批次提取的蛋白，胶跑出的条带都不一致，这是什么原因呢？
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31 个回答
notsmartxiaoyi
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可能与以下几点相关：1、尽可能保证系统一致，包括试剂，液体，仪器；2、操作者的熟练程度；3、蛋白反复冻融降解。
dxy_iwqdsrj
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加入样本时未能使其均匀
香OTFK
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可能涉及几个原因：1，拔梳子时胶错动，加入样本后渗入其他孔或漏出。因为内参表达高，可能不会显示出差异。2，加入样本时不均匀也可能会产生误差。3，制胶应保证均匀无气泡，玻璃板干净，这样才能保证结果一致可靠。
ssfmeiyu
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很肯定的是LZ加入样本时未能使其均匀
dxy_j6u055yr
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可能你的目的蛋白易分解，上样前蛋白是否混匀，实验中样品有没有置于冰上。
yanghai-suda
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ECL发光液没有铺均匀，不一致的条带旁边是否有保护孔，这两个因素都有可能影响条带。
中科联盟
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可能你的目的蛋白易分解，上样前蛋白是否混匀，实验中样品有没有置于冰上。
shefoundme
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如果实验经常出现这种问题，可能就是您该换荧光二抗的时候了[微笑]如果参考LI-COR Odyssey的建议，您首先要确保内参的可靠性，其次，需要确保成像系统没有过曝（内参由于丰富高，一般的ECL成像非常容易过曝），因为过曝后的数据不具备参考性。
钉豆钉
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最终的曝光步骤也挺关键的，压片的力度 均匀度，时间，以及ECL的残留都会对条带有影响，
总有二狗想咬朕
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1.你蛋白的问题，虽然是同一批的，但是可能在蛋白表达与纯化过程中难免会出现个别的异类；2.你的操作流程，不管做什么都会有误差，不可能每次的做的都一样，我们只能减少误差，所以可能你觉得自己每次都做得一样，但是可能某个小细节你并没有发现；3.试剂，也许你的试剂已经不能用了，或者溶度不对了都会影响你的实验。
做一个实验来说唯一原则就是精准，也许你这次做出来了下次就做不出来了，每次做的时候写下来，不要嫌麻烦，这样做错了能省很多时间。
无名冷雨
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这个问题我以前在做western blotting的时候也遇见过，楼主说是内参一致，而目的条带每次都不一样，我想说原因可能是在显影液环节，简单来说就是你的膜没有淋干净，上面残留参差不齐的T/TBS，T/TBS能稀释显影液，目的条带本来表达量就少，某一个点残留的T/TBS稍微多一点就可能导致显影效果下降，所以建议在显影液反应前，尽量将膜上的洗膜液淋掉（当然也不能让膜干了，要是实验室富裕的话，也可以多添点显影液，效果一样），希望对你有帮助。
momo琳
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我也出现这种情况，我做的是组织蛋白更不稳定，内参跑的很漂亮但是目的条带只能呵呵了，我个人觉得因为内参蛋白本身比较稳定而且内参抗体也很成熟所以相对出结果比较好看，而目的抗体就不一样了，样本之间的差别还有抗体的问题（如一二抗特异性，浓度等），光是这两个因素就够做好一阵子了，只能不断摸索了。
健坤免疫组化
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从头到尾看你那个师姐做一遍，你肯定能找到你失败的地方的，另外你可以参考http://www.biomart.cn/experiment/87/question/57601.htm，希望对你有帮助！
yyygo
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。。。洗膜，抗体孵育都是随机的好不啦，会不均匀，蛋白转膜也不完全一样，，这么多不同结果当然也有区别啊，差不太多，确定有就可以啊，WB的资料，最下面的http://www.detaibio.com/material-downloads.html
wyzandrea
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即使是同一种实验，同一种方法，在处理上也会有差别，看看是不是细节除了问题？根据动物实验的经验，许多时候都是细节影响了实验结果！
chloemica
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你好，是不是你的蛋白含量没匹配好，或者是菌落的问题呢？我之前咨询过Creative Biolabs 关于膜转运蛋白的问题，或许你可以看看他们网站上有没有关于这个的介绍。这里是他们的官网，希望有用，仅供参考！
咸蛋超人不会飞
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我感觉应该是付抗体不匀，再就是曝光液要加均匀
好学小王子
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我觉得主要是一抗孵育不均匀造成的，其次就电泳液、电转液用新配的，不要用重复利用的，电泳液，电转液中的离子浓度也会影响效果
尼克酰胺腺嘌呤二
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如果没有操作问题的话，此种情况最有可能是目的蛋白抗体孵育不均或者发光液不均匀造成的
临涧
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就个人经验,虽然用WB做出一张满意的结果涉及多个环节,但向上面你提到的内参没有问题,说明各项操作基本是过关的,据我猜测很可能是最后一步曝光出现的问题,加发光液反应的时间及曝光的时间都会对最后的结果产生影响, 还有一种可能你的发光液的稳定性也许不太好,希望对你有所帮助,哪里说的不对也请多指教.
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