wb实验中，小分子蛋白跑不出来的原因及对策？

蛋白样品、PVDF 膜

1、蛋白降解；对策：于冰上提取，buffer 里加蛋白酶抑制剂防止降解。

2、样品保存不当；对策：提取后尽快测定浓度，并煮沸变性，未煮沸样品保存置于 -80 ℃ 保存。

3、胶浓度较低，容易跑过头；对策：换用浓度较高的胶，例如 15% 或者用梯度胶。

4、转膜时间太长，小分子蛋白转过头；对策：减少转膜时间，可尝试 200-250 mA 转 15-30 min 左右。

5、膜孔径太大；对策：换用小孔径如 0.2 μm 的 PVDF 膜。

6、running buffer 不合适；对策：换用 Tricine-Glycine。

7、抗体特异性不佳或失效等其他原因；对策：参考文献选择合适的抗体更换。