合作专家 | 刘建敏博士
病理学与病理生理 中国科学院大学
审核专家 | 聂壹峰博士
纳米生物医学 中国科学院大学
材料与仪器
蛋白样品、PVDF 膜
步骤
1、蛋白降解；对策：于冰上提取，buffer 里加蛋白酶抑制剂防止降解。
2、样品保存不当；对策：提取后尽快测定浓度，并煮沸变性，未煮沸样品保存置于 -80 ℃ 保存。
3、胶浓度较低，容易跑过头；对策：换用浓度较高的胶，例如 15% 或者用梯度胶。
4、转膜时间太长，小分子蛋白转过头；对策：减少转膜时间，可尝试 200-250 mA 转 15-30 min 左右。
5、膜孔径太大；对策：换用小孔径如 0.2 μm 的 PVDF 膜。
6、running buffer 不合适；对策：换用 Tricine-Glycine。
7、抗体特异性不佳或失效等其他原因；对策：参考文献选择合适的抗体更换。
来源：丁香实验
