为什么Ｗｂ蛋白样品，上样前需要煮？

加热时蛋白质变性，蛋白质的结构被打开，其中加的Sds可以破坏蛋白质的氢键，是蛋白质去折叠，在电泳时，蛋白迁移只与蛋白的分子量有关

上样前煮蛋白有助于蛋白充分裂解。

为了打开蛋白的二级结构，让蛋白跑胶，只受分子量影响

使蛋白质变性完全，彻底变性伸展为一级结构，煮沸离心后电泳时请勿吸取到管低沉淀，沉淀会堵塞泳道造成拖尾。

煮后蛋白内的化学键被破坏，成为分子量完整的分子，不煮沸的话，蛋白中的化学键会影响实验

变性SDS PAGE，上样前要加loading buffer煮一下，里面sds和还原剂，可以将样本中蛋白拉直打开二硫键 并让其带有均匀的负电荷，甘油是样本落在点样孔的底部，溴酚蓝电泳中的前沿指示

加热变性后蛋白的二级三级结构被打破，蛋白成线性，跑的速度跟分子量成线性关系。不同大小的蛋白容易跑得开

一是灭活蛋白酶，二是经过高温处理，其目的是将SDS 与蛋白质充分结合，以使蛋白质完全变性和解聚，并形成棒状结构同时使整个蛋白带上负电荷；SDS 可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构，从而只根据分子量大小的不同导致跑胶的速度不同，排除了因空间结构的不同所造成的误差

只有煮沸，才能消除蛋白质的立体二级结构，伸展为一维线性结构，所以一般来讲二聚体都会解体，才能完全按照分子量跑电泳，加的蛋白Marker才有指示分子量的意义！二硫苏糖醇或巯基乙醇可以破坏二硫键，煮加速蛋白质的变性，SDS的存在可以使每个氨基酸带相同的电荷，使整个蛋白呈线性结构。100度煮10min后13000，离心5分钟，取上清电泳，因为沉淀会导致拖尾。也可以取上清到另一管，4度可以放一周备再次电泳。