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为什么Wb蛋白样品,上样前需要煮?

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dxy_r3n261o2

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9 个回答

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正经人呀

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加热时蛋白质变性,蛋白质的结构被打开,其中加的Sds可以破坏蛋白质的氢键,是蛋白质去折叠,在电泳时,蛋白迁移只与蛋白的分子量有关

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申东熙老伯

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上样前煮蛋白有助于蛋白充分裂解。

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juyue2010

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为了打开蛋白的二级结构,让蛋白跑胶,只受分子量影响

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哎呀呀呀呀哎

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使蛋白质变性完全,彻底变性伸展为一级结构,煮沸离心后电泳时请勿吸取到管低沉淀,沉淀会堵塞泳道造成拖尾。

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毛利小五郎的徒弟

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煮后蛋白内的化学键被破坏,成为分子量完整的分子,不煮沸的话,蛋白中的化学键会影响实验

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NatureBios

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变性SDS PAGE,上样前要加loading buffer煮一下,里面sds和还原剂,可以将样本中蛋白拉直打开二硫键 并让其带有均匀的负电荷,甘油是样本落在点样孔的底部,溴酚蓝电泳中的前沿指示

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balalaLy

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加热变性后蛋白的二级三级结构被打破,蛋白成线性,跑的速度跟分子量成线性关系。不同大小的蛋白容易跑得开

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Dr_劉医生

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一是灭活蛋白酶,二是经过高温处理,其目的是将SDS 与蛋白质充分结合,以使蛋白质完全变性和解聚,并形成棒状结构同时使整个蛋白带上负电荷;SDS 可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构,从而只根据分子量大小的不同导致跑胶的速度不同,排除了因空间结构的不同所造成的误差

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huarenqiang5

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只有煮沸,才能消除蛋白质的立体二级结构,伸展为一维线性结构,所以一般来讲二聚体都会解体,才能完全按照分子量跑电泳,加的蛋白Marker才有指示分子量的意义!二硫苏糖醇或巯基乙醇可以破坏二硫键,煮加速蛋白质的变性,SDS的存在可以使每个氨基酸带相同的电荷,使整个蛋白呈线性结构。100度煮10min后13000,离心5分钟,取上清电泳,因为沉淀会导致拖尾。也可以取上清到另一管,4度可以放一周备再次电泳。

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