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考虑以下几点原因:
1.将终止液当做底物或者酶结合物使用
2.洗涤液桶受到污染,有YZ酶活性的物质存在或者蒸馏水受到污染。
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试验结果白板,而且对照不显色,常见原因如下:
原因1:漏加或者误加试剂;
解决方法:检查试验记录和剩余试剂。每次加液前均应核对标签。
原因2:试剂过期;
解决方法:使用有效期内的产品。
原因3:洗板液配制中出现问题,如量筒不干净含HRP酶抑制物(叠氮钠等);
解决方法:使用干净的器皿,正确配制试剂。
原因4:温育的时间或温度不够;
解决方法:校正温育箱温度。
原因5:标准品失活或者丢失;
解决方法:标准品正确保存、溶解和混匀。
原因6:抗体失活或者丢失;
解决方法:更换抗体或者提高抗体浓度
原因7:酶失活或者丢失
检查方法:把工作浓度的酶再稀释20-100倍,取5uL加入50ul的显色底物,终止后显色是否能达到1.0左右,此为酶的粗略估计。
解决方法:更换酶或者提高酶的浓度。
原因8:显色底物失活
检查方法:加少量的工作浓度的酶,TMB是否很快显色。
解决办法:更换显色底物
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通常有以下可能原因:
底物TMB未充分反应:检测底物TMB是否添加正确,充分反应时间是否足够,有没有受到光照等影响。
酶标仪读板参数设置不正确:检查酶标仪读板波长和校准是否正确,读板时间是否合适,以及光学系统是否正常。
抗体浓度不足:检查抗体浓度是否过低,是否充分反应。
试剂保存不当:试剂保存温度和时间是否正确,避免试剂过期、受到污染等。
其他实验操作问题:如洗板操作是否充分,稀释液是否干净等。
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