V-P实验结果因何被误判

山西省阳泉市疾病预防控制中心 潘盂泉

目前，一些V-P培养基的生产厂家提供的对实验结果判定说明是接种细菌于37℃培养24h，滴加V-P甲、乙液后在30min内观察结果，变红色为实验阳性，不变色为阴性。然而在实际工作中，笔者发现此方法会造成一些实验结果的误判，并不是所有的细菌都适用上述判定方法。

V-P实验常用于细菌检测，可检验细菌利用葡萄糖产生中性乙酰甲基甲醇的能力，在碱性环境下，乙酰甲基甲醇被空气中氧气氧化成二乙酰，二乙酰与培养基内蛋白胨中精氨酸所含有的胍基反应可生成红色化合物。

为了获得有效的实验数据，实验菌种选用CICC,21633单增李斯特氏菌（以下简称单增菌），质控菌种选用CICC,10041蜡样芽孢杆菌（以下简称蜡样菌），V-P培养基选用同一厂家、同一批次、且在有效期内的生化管。

蜡样菌V-P培养基培养24h，滴加甲、乙液后30min内呈现阳性，证明试验用V-P培养基无质量问题。单增菌V-P培养基分别于30℃和37℃培养24h、48h、72h、96h，实验结果如下表。通过实验我们发现两种现象。

其一，单增菌培养的时间短，出现阳性结果慢，随着培养时间延长，阳性结果出现的时间缩短。其二，48h内，单增菌于30℃培养要比在37℃培养阳性结果出现的快些。

究其实验原理，V-P实验显色不同于糖醇类培养基颜色变化，因其中所含指示剂变化特别灵敏。该实验最终出现红色物质与二乙酰的含量有直接关系，二乙酰含量大，它与胍基生成的红色物质就多，观察到培养基显红色的速度就快，二乙酰含量少则反之。

试验中，随着培养时间的延长，单增菌利用葡萄糖生成的乙酰甲基甲醇含量越来越多，乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰的含量也就越来越多，从而阳性结果显现的时间随之缩短。相对于37℃，单增菌于30℃培养更适宜生长，并且在相同的培养时间内，其利用葡萄糖生成的乙酰甲基甲醇含量更多些，尤其48h内表现得更为突出。

从大量的实际工作中我们发现，有些细菌的生化实验不应完全按照试剂盒说明书的方法去做，应参考其生物学特点，在必要时做出适当的调整，才能得到更加可信、满意的实验结果。

正如上述实验，若按试剂盒提供的结果判定说明，培养72h内的阳性结果均超过30min，理应判定为阴性，而单增菌更适宜于30℃生长，且生长缓慢，从而V-P实验需要适当的延长培养时间，4h内观察结果为宜，所以不能轻易地判定为阴性。