材料与仪器
1、一次性瓶或玻璃器皿，微量离心机
2、PI染色液，冷PBS，Annexin V-FITC，1X Binding Buffer
3、细胞
步骤
1、离心收集悬浮细胞，微量离心机转速2000RPM，离心时间5min，弃培养基
2、用冷PBS洗涤细胞两次
3、用400ul 1X Binding Buffer悬浮细胞，浓度大约为1 X 10 cells/ml
4、在细胞悬浮液中加入 5ul Annexin V-FITC，轻轻混匀后于2-8°C避光条件下孵育 15 分钟
5、加入10ul PI 后轻轻混匀于 2-8°C 避光条件下孵育 5 分钟； 在 1 小时内用流式细胞仪或荧光显微镜检测
注意事项
1、旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落
2、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞
3、Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质，在操作时请注意避光
4、成功的检测凋亡受以下几种因素的影响：
- 如细胞类型
- 细胞膜上 PS 的密度
- 发生凋亡时 PS 翻转的比例
- 诱导细胞凋亡的方法
- 所用试剂
- 诱导凋亡的时间等
把这些影响因素进行优化对实验成功与否至关重要。
来源：丁香实验
