Annexin-v 染色

1、一次性瓶或玻璃器皿，微量离心机

2、PI染色液，冷PBS，Annexin V-FITC，1X Binding Buffer

3、细胞

1、离心收集悬浮细胞，微量离心机转速2000RPM，离心时间5min，弃培养基

2、用冷PBS洗涤细胞两次

3、用400ul 1X Binding Buffer悬浮细胞，浓度大约为1 X 10 cells/ml

4、在细胞悬浮液中加入 5ul Annexin V-FITC，轻轻混匀后于2-8°C避光条件下孵育 15 分钟

5、加入10ul PI 后轻轻混匀于 2-8°C 避光条件下孵育 5 分钟； 在 1 小时内用流式细胞仪或荧光显微镜检测

1、旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落

2、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞

3、Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质，在操作时请注意避光

4、成功的检测凋亡受以下几种因素的影响：

• 如细胞类型
• 细胞膜上 PS 的密度
• 发生凋亡时 PS 翻转的比例
• 诱导细胞凋亡的方法
• 所用试剂
• 诱导凋亡的时间等

把这些影响因素进行优化对实验成功与否至关重要。