细胞染色

荧光显微镜观察1．收集细胞，PBS 洗涤细胞一次，2000 rpm 离心 5 分钟，用 PBS 重悬细胞，调整细胞浓度约为 106 个/ml；2．取 100 μl 细胞悬液，加入 2-10 μl PI 染液，轻轻混匀；3．4℃ 避光放置 5 min 后，滴加于载玻片上，加盖玻片；4．荧光显微镜检测。 流式检测：1．收集细胞，PBS 洗涤细胞一次，2000 rpm 离心 5 分钟，用 PBS 重悬细

1、离心收集悬浮细胞，微量离心机转速2000RPM，离心时间5min，弃培养基2、用冷PBS洗涤细胞两次3、用400ul 1X Binding Buffer悬浮细胞，浓度大约为1 X 10 cells/ml4、在细胞悬浮液中加入 5ul Annexin V-FITC，轻轻混匀后于2-8°C避光条件下孵育 15 分钟5、加入10ul PI 后轻轻混匀于 2-8°C 避光条件下孵育 5 分钟； 在 1

首先可将成品 JC-1 以 DMSO 配成储存液 (1～5mg/ml)，储存于-20℃，用时以培养液稀释至 10ug/ml 终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去培养液，漂洗细胞后直接加入染色液，10-30min后在荧光显微镜下或者激光共聚焦下观察。线粒体状态好时细胞以绿色为主，当红光信号增强时，红绿相叠，以橙色为主。该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测，收集红/绿信号强度，计算其强度比。

组织：（1）需要染色的组织做冰冻切片，切片复温侯，用 PBS 轻柔洗涤 3 次，每次 5 分钟。（2）用组化笔圈住组织，加入适当体积的染色固定液固定 30 分钟，体积以充分覆盖组织为宜。（3）去除染色固定液，用 PBS 洗 3 次，每次 8 分钟。（4）去除 PBS，每个组织加 30 μl SA-β-gal 染色液，最好正个切片浸泡在染色液中，可用保鲜膜封住防止蒸发，37 ℃ 孵育过夜。（5）第二

Jurkat 细胞系作为实验室常用的人类 T 细胞白血病细胞系，通常用于研究免疫生物学和癌症生物学相关的问题，而流式细胞术很适合检测 T 细胞的信号水平。本方法以 TCR 的刺激后检测 pERK 水平为例。