重链曝不出来目的条带却能曝出来

可能的原因有 3 个： 1）一抗效价不好。 2）抗原太稀。 3）封闭时间过长。

解决的方法： 1）换用一抗或增加一抗用量。 2）增加抗原浓度。 3）缩短封闭时间，封闭时间一般 37 摄氏度 3 个小时，或者 4 摄氏度过夜。不能比这个更长了。

原因可能是没洗干净，如果是这个原因，随便再用几种其它抗体，也能检测到类似条带。

也可能是目的蛋白可以与IgG或珠子非特异性结合，可以考虑改一改实验设计，一个转空载质粒、一个转FLAG融合蛋白，都用anti-FLAG抗体做Co-IP，就不需要再用IgG。当然，此方法也未必能完全解决问题。

在 Co-IP 中，抗体的质量是影响实验成功的一个重要因素。在您的实验中，如果目的基因的条带能曝出来，这表明蛋白质的结合和免疫印迹的过程可能是正确的。因此，问题可能出在您使用的抗体上。

首先，检查您使用的 lgG 抗体是否经过有效的验证，确保其可以特异性地结合到目标蛋白。其次，确保使用的抗体浓度和孵育时间都是合适的。如果您的 lgG 抗体浓度过低或孵育时间太短，那么它可能无法充分结合目标蛋白，从而导致没有条带出现。此外，您也可以尝试优化 Co-IP 的实验条件，例如缓冲液的成分和浓度、孵育温度和时间等。