Elisa实验中，结果空白背景高，一般是什么原因？

常见原因如下：

1）洗板不干净；

2）显色液变质或者试剂过期；

3）试剂稀释有误，如加酶的浓度过高；

4）蒸馏水受酶等污染；

5）试剂混用；

6）培养箱温度超过37℃或反应时间过长。

1抗体、抗体的浓度不合适

抗体质量不好，特异性不高可能会与封闭液（BSA）产生交叉反应，可以用 0.8% 的明胶代替，本底就很好了。

抗体亲和力不好，也会如此，由于加大了抗体的使用量，必然造成了非特异性增加的可能。

以下是一些常见的可能性：

微孔板未清洗干净：在实验前应仔细清洗微孔板，确保没有任何杂质残留。特别是在使用复合物或高黏度样品时，更容易残留，需要格外小心。

试剂或缓冲液出现污染：在配制或储存试剂和缓冲液的过程中，可能会出现污染，导致背景信号增高。使用前需要检查试剂的质量，并确保没有受到污染。

光学读数仪设置有误：如果光学读数仪的波长或增益设置不正确，也可能导致背景信号偏高。需要确认读数仪的设置是否符合实验要求。

试剂稀释不当：试剂过浓或过稀都可能导致背景信号偏高。需要根据实验要求调整试剂的浓度。

微孔板存放条件不佳：微孔板存放过程中受到光照或高温等不良条件可能导致背景信号增高。需要将微孔板保存在合适的条件下，避免受到外界不良影响。

针对以上可能性，可以逐一排查，找到可能的原因并进行改进，以提高实验的准确性和可靠性。