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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
加样的时候样品老飘出来是为什么?
天野
1.loading buffer的甘油太少,时间放置过长,浓度不对(5×、1×)2.电泳液放置时间过长、浓度太高3、胶没配好或拔梳子用力不均匀,上样孔中有凝胶
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问
为什么 WB 未显影?
木木的世界
转膜的时候,一张膜的电极放反了,就会导致蛋白没有转到膜上。
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问
血浆可以做 Elisa 实验吗?
闫棟涵777
紫盖采血器采血后离心结果影响大么
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问
western相关试剂怎么选?
我是金博士
BSA 亚科的我们用3%封闭液我们一般用3-5次,4度保存是的用undefined的洗涤缓冲液,这几个蛋白我们做的多了,easy
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问
WB,条带特别多,不知道是哪条?
moxucheng
二抗有问题
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问
做 IP 的抗体为什么会在 WB 中显现出 IgG 条带?
wyf-525
加入的A蛋白抗体和IgG 抗体,在最后一步的煮样中,被β巯基乙醇破坏了结构,变成了重链和轻链,随后由于A蛋白抗体和你的B蛋白抗体种属来源相同,又被你的B蛋白抗体识别出来,所以显影就出现了条带。
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问
如何让分离胶面平整 ?
名闻天下
可能你的胶槽不平,第二你的压胶的液体太少,至少1ml,第三,你必须要等胶干了才能晃动胶槽,夏天至少30min,冬天更久50min,我一般加的纯水好像没什么事。。
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问
我的WB条带出现在它不应该出现的地方怎么办?
赵栋2012
qingshi战友回答:我想你可以从几下方面考虑:1. 从组织中提取的蛋白春不纯,用什么方法抽提,抽提完了后,PAGE的结果怎么样?2. 如果PAGE结果明显,而WESTERN无信号,你应该考虑两点:60KD左右的物质可能是什么,抽提过程中自带的,还是il-6形成DIMER?第二复核你用的抗体3. 一定要跑变性不连续电泳,CHECK你用的LOADING BUFFER。4. 换用标准品的IL-6,作
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问
跑WB的内参,只有一个孔没有条带,但是其余的孔都有条带,而且上样量是50ug,怎么回事?
你过de好吗
我的也是,不过我是最后一个孔内参条带没有,跑两次都这样
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问
western blot中,如何运用凝胶成像系统照相?加完二抗用TBST洗之后该做什么准备?不想用胶片显影了
dxy_9qshwa77
请问那个bio-rad成像系统怎么拍这个照片呢?
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问
稳定株real-time PCR检测表达升高1000倍 WB检测蛋白没有明显变化是为什么?
hl16010921
mRNA的量和蛋白表达量不是线性相关的,有时甚至不是正相关的(特别是抑制核糖体的调控因素时常常如此)。WB反应的是蛋白表达情况,mRNA上升1000倍,但细胞不可能将所有的核糖体都用于翻译这个蛋白,另外细胞膜的空间能容纳1000倍的该蛋白吗(细胞膜本身就镶嵌了大量蛋白,细胞大小不变,膜的表面积也就不变)。还有你看看是否可以用该蛋白敲除的细胞作空白对照,现在无法排除质粒本身会影响该蛋白的內源性表达。
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问
请教有关TSC2蛋白的转膜条件是什么?
天王盖地虎-0
Tuberin 我们也在做,或许可以把你的样本给我试试我手里的抗体
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问
做分子量270的蛋白电泳和转膜什么条件比较合适?
龟龟的花裤子
你好,我们跑的蛋白是220的 跑不出来 你的电泳和转膜的时间都是多少啊
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问
检测膜蛋白与另一蛋白相互作用,膜蛋白不表达?怎么解决?
dxymuchong
可以外转膜蛋白基因,再做co-IP啊,或者也可以做做IF(免疫荧光)看是否有共定位
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问
western blot 实验中组织提取蛋白最小量是多少?
勇者无疆2011
这个要看你的目的蛋白在你的这个标本--肺动脉里面表达的量的多少了,如果太少了,那估计是不行哦,但表达丰度较高,那肯定可以了。
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问
WB的内参一直做不齐是什么原因?
张振1986
你的这个问题是非常常见的,就算在实验室专业做WESTERN的人员,也会遇到内参不齐的问题。单独上样可以出现,可以排除蛋白本身的问题,但混合一起加时却跑的不齐,最大的可能就是胶的问题,胶配的不均匀导致蛋白跑的不在同一水平。在就是抗体孵育问题,不知你是用孵育盒,还是用封膜孵育,一定要保证膜与抗体充分接触,保证孵育效果。三是显影剂是预混还是混合好的,注意混合比例,祝楼主早日跑出理想的条带。
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问
刚买回来的抗体,如何对它的质量好坏进行评价?
caiyunmm
哦哦,一般都做什么重复验证实验啊。。有文献推荐么。。
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问
转膜内参不是很清楚该怎么办?
糖guo
也可以考虑放两张膜来转
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问
大鼠肠粘膜组织的蛋白(例:occludin)如何提取?现在用的凯基全蛋白提取液G250,用哪种loading buffer?
Sherlock4ZFB
你好,我想问一下你做的肠粘膜组织是怎么提的?直接划下来吗?还是有其它的方法,能否告知一下?
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问
RIPA 裂解细胞过程中体积逐渐变少怎么办?
碳酸镧
加完裂解液就用刮刀刮下来吸到EP管里再放置在冰上,不要先放置再刮,不然就容易干
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