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求助 | 为什么总有杂带呢,连内参都有

相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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再熬下去要秃头

最近跑的蛋白好几次出现了杂带,连内参都有,请教一下大家,谢谢了!

上面是两次的GAPDH,有杂带,最下是GPX4,也很多条杂带,我是直接加loading,用细胞刮收集,100度煮15min后离心,5%脱脂奶粉封闭2h,一抗用的CST的1:1000,二抗1:5000,条带都是洗10min5次。还想问一下,如果有杂带,是不是就不能用这个条带啊

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5 个回答

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bamboopiggy

有帮助

可以用,趋势在就可以用,这个杂带是抗体问题。

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balalaLy

有帮助

gapdh的杂带也挺明显,说明不一定是目的蛋白一抗的问题,二抗调到1:10000试一下

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Eason老歌迷

有帮助

有很多原因可以导致杂带。比如说你的抗体特异性不高,你可以换个抗体试一试,看看效果。

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Mani-F

有帮助

试一下用5%脱脂奶粉,4℃封闭过夜。

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天一湖医者

有帮助

1、更换一抗,换单克隆的。

2、不换一抗,降低一抗稀释比,这样目的条带会变弱,不过杂带也会,有时候就可以去掉杂带了。

3、多封闭一下。

4、洗膜的时候多洗几次。

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