再熬下去要秃头
最近跑的蛋白好几次出现了杂带,连内参都有,请教一下大家,谢谢了!
上面是两次的GAPDH,有杂带,最下是GPX4,也很多条杂带,我是直接加loading,用细胞刮收集,100度煮15min后离心,5%脱脂奶粉封闭2h,一抗用的CST的1:1000,二抗1:5000,条带都是洗10min5次。还想问一下,如果有杂带,是不是就不能用这个条带啊
bamboopiggy
可以用,趋势在就可以用,这个杂带是抗体问题。
balalaLy
gapdh的杂带也挺明显,说明不一定是目的蛋白一抗的问题,二抗调到1:10000试一下
Eason老歌迷
有很多原因可以导致杂带。比如说你的抗体特异性不高,你可以换个抗体试一试,看看效果。
Mani-F
试一下用5%脱脂奶粉,4℃封闭过夜。
天一湖医者
1、更换一抗,换单克隆的。
2、不换一抗,降低一抗稀释比,这样目的条带会变弱,不过杂带也会,有时候就可以去掉杂带了。
3、多封闭一下。
4、洗膜的时候多洗几次。