求做western和IP裂解蛋白的注意事项(小分子蛋白10kd左右)，因为一直IP不下来，input有时候也无条带……

裂解蛋白，一定要在冰上进行，因为有的蛋白很容易降解，尤其是现在天气热，你搁常温一会就降解了

1.wb和IP的lysis buffer不一样，wb的要裂解的强一些，IP的要弱一些。 2.转膜用0.22um的膜

input也没有，会不会是核蛋白没有裂解出来？

用超声充分裂解，延长裂解时间。

小分子蛋白WB可以用4-20%梯度胶试试，转膜用0.22umPVDF膜

尽量选择0.2μm的膜，缩短转移时间；可以选择PSQ膜，同时缩短转移时间。也可以将两张膜叠在一起，再电转。

可选择孔径0.22um的PVDF膜或者NC膜，转膜时间缩短，另外可采用Tricine-SDS-PAGE体系